New England Biolabs（NEB）公司近日推出了一種性能強勁的DNA聚合酶——Q5超保真DNA聚合酶。它不僅帶來了極為出色的保真度，還確保了各種擴增子的可靠擴增，而無論其GC含量如何。
對于測序、SNP檢測、蛋白表達和基因功能研究等應(yīng)用而言，高保真擴增是很關(guān)鍵的。然而，知易行難。對于某些富含GC的區(qū)域或具有挑戰(zhàn)性的序列，高保真PCR談何容易，經(jīng)常要優(yōu)化很多次，還是產(chǎn)量不高，或有非特異條帶。而對于新一代測序而言，后果則更為嚴重。文庫制備時的任何偏向都會帶來序列拼接的困難，甚至是序列丟失。這個問題也常常困擾著科學(xué)界的人們。
以往的高保真聚合酶總是給人以效率低、擴增慢的感覺。而Q5超保真DNA聚合酶的延伸速度則有了很大的改進。對于簡單的模板，比如質(zhì)粒或大腸桿菌基因組DNA，延伸速度可達10 s/kb；而即使是植物、哺乳動物基因組DNA等復(fù)雜模板，在1 kb以下時，延伸速度仍為10 s/kb，超過1 kb時，速度也達到20-30 s/kb。
Q5的緩沖液體系也為PCR產(chǎn)物的成功擴增立下汗馬功勞。它確保了各種擴增子的可靠擴增，而無論其GC含量如何。對于GC含量在65%左右的常規(guī)或復(fù)雜擴增子，Q5 Reaction Buffer帶來了可靠的擴增。而對于更高GC含量的擴增子，Q5 High GC Enhancer的添加則確保了高性能。
Q5還有一個熱啟動版本，全名為Q5熱啟動超保真DNA聚合酶（這名字可真長?。Ｅc常規(guī)的化學(xué)修飾或抗體熱啟動不同，Q5熱啟動利用了一種*的適體（aptamer）。這種分子通過非共價相互作用與聚合酶結(jié)合，在反應(yīng)建立時阻斷其活性。進入循環(huán)過程后，聚合酶激活。Q5熱啟動不需要單獨的高溫激活步驟，縮短了反應(yīng)時間，使用上也更方便。
Q5和Q5熱啟動目前都有單獨的酶或2x預(yù)混液形式可供選擇。另外，NEB還專門開發(fā)出一種單獨的配方NEBNext High-Fidelity 2X PCR Master Mix，以滿足新一代測序文庫制備的需求。
Q5的五大優(yōu)勢：
1. 保真性 – 極為出色的保真度，比Taq酶高50倍 2. 可靠性 – 高特異性和產(chǎn)量，且優(yōu)化極少
3. 覆蓋度 – 各種擴增子上的性能（從高AT到高GC） 4. 速度 – 短的延伸時間
5. 擴增子長度 – 20 kb簡單模板和10 kb復(fù)雜模板的可靠擴增
為此，NEB推出了Q5。據(jù)稱，這種DNA聚合酶的保真度比普通的Taq酶高50倍，導(dǎo)致擴增產(chǎn)物的錯誤率極低。為什么會這么高？這是因為聚合酶與Sso7d DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域融合，從而改善了保真度、速度和性能可靠性。
