ELISA抗原競爭法檢測樣品中sIL-2R含量
【基本原理】
本法是用純化或重組的IL-2R（α鏈，P55，CD25，Tac抗原）蛋白包被96孔酶標反應板，同時加入已知量的抗IL-2RMcAb，再分別加入sIL-2R標準品與待測樣品。則待測sIL-2R或者sIL-2R標準品與包被的純化或重組的IL-2R蛋白競爭與抗IL-2R McAb結合。通過與標準品對照，從抗IL-2R McAb與包被的純化或重組的IL-2R蛋白結合受抑制程度來求得待測樣品中sIL-2R含量。
【材料和試劑】
（1） 純化或重組的IL-2R蛋白（α鏈，P55，CD25，Tac抗原）（40.000u/ml）
（2） FITC標記的抗IL-2R McAb（0.2μg/ml）：FITC為異硫氰酸熒光素，這里僅作為半抗原使用，而不作為熒光素標記。
（3） 堿性磷酸酶標記的兔抗FITC抗體（酶標抗體）
（4） 對硝基苯磷酶鹽底物液；用pH9.8的二乙醇胺緩沖液溶解，配成濃度為1mg/ml。
（5） 1%牛血清白蛋白-PBS（1%BSA-PBS）：為封閉液點稀釋液
（6） 不同倍比稀釋度的sIL-2R標準品：以1% BSA-PBS稀釋。
（7） 洗滌液（0.05%Tween20-PBS）
（8） 待測sIL-2R樣品
（9） 96孔酶標板（聚苯乙烯板），酶標儀，波長465nm濾光片
（10） 刻度吸管，毛細吸管，加樣器（頭），4℃冰箱
【操作步驟】
（1） 以一定濃度的純化或重組的IL-2R（P55）蛋白包被96孔酶標板，100ul/孔，4℃過夜（16-72h）；
（2） 棄包被液，用1%BSA-PBS封閉非特異性結合位點，200ul/孔，置室溫2h；
（3） 用洗滌液加滿各孔置3min，然后傾去，反復洗滌3次；
（4） 分別加入不同稀釋度的sIL-2R標準品及待測樣品，50μl/孔；
（5） 各孔均加入FITC標記的IL-2R McAb，50μl/孔，充分混勻后置室溫2h；
（6） 同上洗滌3次；
（7） 各孔均加入堿性磷酶酶標記的兔抗FITC抗體，100μl/孔，置室溫1h；
（8） 同上洗滌3次；
（9） 各孔均加入底物液，100μl/孔，置室溫15-30min；
（10） 用酶標儀以波長405nm測各孔OD值。
【結果分析】
（1） 以sIL-2R標準品各稀釋度對應的濃度值為橫座標（X），相應的OD值為縱座標（Y），在普通座標紙上繪制競爭抑制標準曲線，OD值隨標準品sIL-2R濃度升高而降低。
（2） 根據(jù)待測樣品所測得的OD值，在標準曲線上查得樣品sIL-2R含量。
（3） 本方法測定sIL-2R含量時，不需要計算抑制百分率。
【注意事項】
（1） 本方法的敏感度低，大約為5000u/ml，大大低于雙抗體夾心ELISA法（10u/m）。因此不適合檢測正常人標本中sIL-2R含量，僅適用于檢測sIL-2R含量極度增高的樣品，如接受抗IL-2R抗體治療、毛細胞性白血病等患者標本，或作為監(jiān)測移植排斥反應的一個指標。
（2） 若無純化或重組的IL-2R蛋白，可用PHA刺激的外周血單個核細胞（或MT-2細胞）包被96孔酶標板，吹干，固定，再用1% H2O2處理以抑制內源性過氧化物酶后即可使用。
（3） 其余多見雙抗夾心ELISA法測定sIL-2R含量部分。
（4） 試劑配制多參見TNF-α的免疫學檢測部分。
ELISA抗原競爭法檢測樣品中sIL-2R含量
