入了ELISA的門 這些技術點你得知道
閱讀：2075發(fā)布時間：2014-12-29
為了得到更好的實驗結果，一些ELISA試劑盒實驗新手們還需多加了解技術內容，公司每周都會為您精心整理出重點技術要領，能夠熟練的掌握好這些之后再應用到實驗里面就會簡單的多。今天的主要內容是入了ELISA的門，這些技術點你得知道。
樣本加樣方法
1、細胞上清：前處理必須是細胞離心去除，每孔直接加100μl即可。如果濃度太高需稀釋時，用標準品稀釋液直接稀釋。
2、腦脊液：前處理必須是細胞離心去除，每孔直接加100μl即可。如果濃度太高需稀釋時，用標準品稀釋液直接稀釋。
3、血清血漿：請加入50ul樣本分析緩沖液后加50ul標本,如稀釋量大，請將樣本與樣本分析緩沖液等量加入，不足部分用標準品稀釋液補充至100ul。
A.血清標本應是自然凝固后，取上清，避免在冰箱中凝固血液；
B.血漿標本，推薦用EDTA的方法收集若待測樣本不能及時檢測，標本收集后請分裝，凍存于－20℃，避免反復凍融。
C.血清標本不應添加任何防腐劑或抗凝劑；
D.標本應清澈透明，檢測前樣本中如有懸浮物應通過離心去除。
E.請勿使用溶血，高血脂或污染的標本檢測，否則結果將不準確。
4、組織勻漿液的樣本，要制備過程中需要在緩沖液中加入蛋白酶抑制劑，防止蛋白成份被內源性蛋白酶降解，造成檢測結果的值偏低。
因組織勻漿液的樣本蛋白種類多，含量豐富，實驗參照血清血漿標本的處理方法進行，否則就會影響實驗結果。具體是加入50ul樣本分析緩沖液后加50ul標本，需稀釋時，請將樣本與樣本分析緩沖液等量加入，不足部分用標準品稀釋液補充至100ul。
因為目標蛋白不同，可能造成降解的蛋白類型可能不一樣，如果實驗前通過文獻確定用哪種蛋白酶抑制劑，有針對性加入，可節(jié)省抑制劑。如果查不到相關文獻，可采用組合抑制的辦法確保蛋白不易被降解。
