人P選擇素ELISA 檢測試劑盒
本試劑僅供研究使用 標(biāo)本：血清或血漿
試驗原理：
P-selectin試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知P-selectin濃度的標(biāo)準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進行檢測。先將P-selectin和*標(biāo)記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中P-selectin的濃度呈比例關(guān)系。
自備材料
蒸餾水。
加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
振蕩器及磁力攪拌器等。
安全性
避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。
實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
人P選擇素ELISA 檢測試劑盒
操作注意事項
試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準品應(yīng)丟棄，不可保存。
實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
按照說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
樣品收集、處理及保存方法
血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液
保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。
人P選擇素ELISA 檢測試劑盒
操作步驟
使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。
根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。
加入稀釋好后的標(biāo)準品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的*標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。
甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。
取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。
在450nm波長處測定各孔的OD值。
局限
6號標(biāo)準品以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標(biāo)準曲線無法得到的結(jié)果。
試劑盒性能
1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標(biāo)準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性：不與人其它細胞因子反應(yīng)。
3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
人P選擇素ELISA 檢測試劑盒
結(jié) 果 判 斷 與 分 析
1、儀器值：于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值
2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y），相應(yīng)的P-selectin標(biāo)準品濃度為橫坐標(biāo)（X），做得相應(yīng)的曲線，樣品的P-selectin含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準曲線換算出濃度。
3、檢測值范圍：0-80ng/ml
4、敏感度： 0.1 ng/ml
Deoxycholic acid, sodium salt 脫氧膽酸鈉鹽 [302-95-4] 10g
Deoxycorticosterone acetate 醋酸去氧皮質(zhì)酮 [56-47-3] 500mg
2’-Deoxycytidine hydrochloride 2’-脫氧胞苷鹽酸鹽 [3992-42-5] 1g
dCDP 2'-Deoxycytidine-5'-Diphosphate, trisodium salt 2’-脫氧胞苷5’二磷酸三鈉鹽 [151151-32-5] 50mg
dCMP 2’-Deoxycytidine 5’-monophosphate, free acid 2’-脫氧胞苷’-5’-磷酸 [1032-65-1] 250mg
dCTP 2’-Deoxycytidine-5'-triphosphate, disodium salt, dihydrate 2’-脫氧胞苷二鈉鹽5’-三磷酸二水 [102783-51-7] 50mg
dCTP 100mM solution dCTP 100mM solution , 2’-脫氧胞苷三鈉鹽5’-三磷酸溶液 / 0.25ml
dCTP 100mM solution dCTP 100mM solution , 2’-脫氧胞苷三鈉鹽5’-三磷酸溶液 / 0.5ml
2-Deoxy-D-galactose 2-脫氧-D-半乳糖 [1949-89-9] 5g
2-Deoxy-D-glucose 2-脫氧-D-葡萄糖 [154-17-6] 10g
dGTP 100mM solution 2’-脫氧鳥苷三鈉鹽5’-三磷酸-溶液 / 0.25ml
dGTP 100mM solution 5’-三磷酸-2’-脫氧鳥苷三鈉鹽溶液 / 0.5ml
2’-Deoxyguanosine, monohydrate 2’-脫氧鳥苷一水 [961-07-9] 1g
dGDP 2'-Deoxyguanosine-5'-Diphosphate disodium salt 2’-脫氧鳥苷5’二磷酸二鈉鹽 [102783-74-4] 50mg
dGDP 2'-Deoxyguanosine-5'-Diphosphate disodium salt 2’-脫氧鳥苷5’二磷酸二鈉鹽 [102783-74-4] 250mg
dGMP 2’-Deoxyguanosine 5’-monophosphate disodium salt 2’-脫氧鳥苷-5’-一磷酸二鈉鹽 [33430-61-4] 250mg
dGMP 2’-Deoxyguanosine 5’-monophosphate disodium salt 2’-脫氧鳥苷-5’-一磷酸二鈉鹽 [33430-61-4] 1g
2′-Deoxyinosine 5′-monophosphate sodium salt 2′-脫氧肌酐-5′-磷酸鈉 [14999-52-1] 250mg
Deoxynivalenol 脫氧雪腐鐮刀菌烯醇 [51481-10-8] 1mg
2-Deoxy-D-ribose 2-脫氧-D-核糖 [533-67-5] 5g
2-Deoxy-D-ribose 2-脫氧-D-核糖 [533-67-5] 25g
2-Deoxy-L-ribose 2-脫氧-L-核糖 [18546-37-7] 5g
2-Deoxy-L-ribose 2-脫氧-L-核糖 [18546-37-7] 25g
2’-Deoxythymidine 2’-脫氧胸苷 [50-89-5] 1g
2’-Deoxythymidine 2’-脫氧胸苷 [50-89-5] 5g
dTDP 2'-Deoxythymidine-5'-diphosphate trisodium salt 2’-脫氧脫氧胸苷5’二磷酸三鈉鹽 [95648-78-5] 50mg
dTDP 2'-Deoxythymidine-5'-diphosphate trisodium salt 2’-脫氧脫氧胸苷5’二磷酸三鈉鹽 [95648-78-5] 250mg
dTMP 2’-Deoxythymidine-5’-monophosphate disodium salt 2’-脫氧胸苷-5’-一磷酸二鈉鹽 [33430-62-5] 250mg
dTMP 2’-Deoxythymidine-5’-monophosphate disodium salt 2’-脫氧胸苷-5’-一磷酸二鈉鹽 [33430-62-5] 1g
dTTP 2'-Deoxythymidine-5'-triphosphate, trisodium salt 5’-三磷酸– 2-脫氧胸苷三鈉鹽 [18423-43-3] 50mg
2’-Deoxyuridine 2’-脫氧尿苷 [951-78-0] 1g
DEPC 焦碳酸二乙酯 [1609-47-8] 100ml
DEPC 焦碳酸二乙酯 [1609-47-8] 5ml
DEPC 焦碳酸二乙酯 [1609-47-8] 25ml
Devarda’s alloy 第威德合金 [8049-11-4] 100g
2’-Deoxyuridine 2’-脫氧尿苷 [951-78-0] 5g
Ethyl eosin 乙基曙紅 [6359-05-3] 25g
