免疫組化、免疫熒光及免疫細胞化學
什么叫免疫組織化學？簡單地說，用已知的抗原或者抗體去檢測待檢組織中的抗原或抗體，根據(jù)其結(jié)合后經(jīng)一系列方法的處理，呈色反應，在光鏡下確定組織的來源屬性和部位。目前免疫組織化學作為病理診斷，鑒別特殊病例，是*的zui重要的手段，國內(nèi)在免疫組織化學的應用方面已經(jīng)普遍地展開并擴展至基層單位，為病理事業(yè)做出應有的貢獻。
什么叫免疫熒光細胞化學？是根據(jù)抗原抗體反應的原理，先將已知的抗原或抗體標記上熒光素制成熒光標記物，再用這種熒光抗體（或抗原）作為分子探針檢查細胞或組織內(nèi)的相應抗原（或抗體）。在細胞或組織中形成的抗原抗體復合物上含有熒光素，利用熒光顯微鏡觀察標本，熒光素受激發(fā)光的照射而發(fā)出明亮的熒光（黃綠色或桔紅色），可以看見熒光所在的細胞或組織，從而確定抗原或抗體的性質(zhì)、定位，以及利用定量技術測定含量。
用熒光抗體示蹤或檢查相應抗原的方法稱熒光抗體法；用已知的熒光抗原標記物示蹤或檢查相應抗體的方法稱熒光抗原法。這兩種方法總稱免疫熒光技術，以熒光抗體方法較常用。用免疫熒光技術顯示和檢查細胞或組織內(nèi)抗原或半抗原物質(zhì)等方法稱為免疫熒光細胞（或組織）化學技術。
免疫熒光細胞化學分直接法、夾心法、間接法和補體法。
什么叫免疫熒光細胞化學？免疫細胞化學（immunocytochemistry）是根據(jù)免疫學原理，利用抗體同特定抗原專一結(jié)合，對抗原進行定位測定的技術。抗原主要為大分子或與大分子相結(jié)合的小分子；抗體則是由漿細胞針對特定的抗原分泌的γ球蛋白。如果將抗體結(jié)合上標記物，再與組織中的抗原發(fā)生反應，即可在光鏡或電鏡下顯示出該抗原存在于組織中的部位。
標記抗體與抗原結(jié)合方式主要有兩種：①直接法：用標記抗體與抗體中的相應抗原直接結(jié)合，操作方法簡便，特異性高，但敏感性較差，此法可用于檢定未知抗原；②間接法：先用未標記的具有特異性的*抗體與樣品中的相應抗原結(jié)合，然后再以標記的第二抗體與特異性的*抗體結(jié)合；第二抗體是用*抗體作為抗原注入另一動物體內(nèi)誘導產(chǎn)生的抗體，然后再結(jié)合以標記物。通過這樣的放大作用，使抗原分子上的標記物大大增多，故間接法較直接法的敏感性大為增高，約高5～10倍，故應用更為廣泛。間接法中較常用的，如過氧化物酶-抗過氧化物酶復合物法（peroxidase anti-peroxidase complexmethod， 標記方法PAP法），該法除需一抗和二抗外，還需要制備HRP標記的抗酶抗體,即以HRP作為抗原免疫動物，制成抗HRP抗體，再以HRP對標記該抗體，制成穩(wěn)定的環(huán)形PAP復合物。標本先后經(jīng)一抗、二抗和PAP復合物處理后再以DAB顯色抗原存在部位可見棕黃色產(chǎn)物。
10年來，免疫細胞學技術有了很大進展，各種新方法相繼建立。單克隆抗體（monoclonal antibody）制備技術極大地提高抗體的特異性與免疫組化染色的性。繼PAP法之后由于*-親合素等試劑的應用，為檢測微量抗原、受體、抗體提供了更的技術。目前常用的*-親合方法有:標記親合素-*法（labelled avidin-biotin method LAB法）、橋連親合素-*法（bridged avidin-biotin method, BAB法）及親素-*-過氧化物酶復合物法（avidin-biotin-peroxidase complex method，ABC法）；現(xiàn)市上有配制成的ABC藥盒供應，使用簡便，是目前廣泛應用的一種方法。
免疫組化、免疫熒光及免疫細胞化學
