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研域（上海）化學(xué)試劑有限公司


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所在地區(qū)：上海上海市

聯(lián)系人：楊經(jīng)理 （經(jīng)理）

技術(shù)文章

染色體制片程序

閱讀：1099發(fā)布時(shí)間：2011-12-5

染色體制片程序
1、取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞一個(gè)T75或T25瓶。
2、將培養(yǎng)基換成10ml DMEM（H）+10%FBS+0.1ug/ml秋水仙素的培養(yǎng)基，處理1~2小時(shí)。
3、將細(xì)胞培養(yǎng)液倒掉，馬上加入3~4ml 0.1%*，并立即搖晃0.5~1min。當(dāng)在顯微鏡下看到分裂相細(xì)胞脫壁后，馬上加入終止液終止消化，并將分裂相細(xì)胞收集在一個(gè)15ml的離心管中，并在1200r/min離心4min。
4、將上清液倒掉，剩余50ul左右的液在管中，并輕微震動(dòng)，使細(xì)胞沉淀重新懸浮。
5、加入10ml的低滲液（0.075M KCL），*毫升要逐滴加入，并邊加邊搖晃。
6、37℃水浴中低滲30min。
7、再加入1ml冰冷的固定液（甲醇：乙酸=3：1 的混合液），并馬上搖勻，離心，1000r/min、10min。
8、同步驟4。
9、加入10ml冰冷的固定液，*毫升要逐滴加入，邊加邊搖晃。
10、室溫下固定30min，然后離心，1000r/min、10min。
11、同步驟4。
12、加入10ml冰冷的固定液，*毫升要逐滴加入，邊加邊搖晃。
13、室溫下固定15min，然后離心，1000r/min、10min。
14、重復(fù)步驟11~13一次。
15、將離心后的上清液倒掉，并加入50~100ul的新鮮固定液重懸細(xì)胞。
16、滴片（玻片要求是濕冷的干凈的，滴片高度要大于30cm。玻片傾斜角度15~30度左右）
17、鏡檢。
染色體制片程序
 


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