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技術(shù)文章

免疫磁珠的應(yīng)用

閱讀:1881發(fā)布時(shí)間:2011-5-20

目前有許多研究者應(yīng)用免疫磁珠來分離細(xì)胞,具體有:

  1 用于純化巨核細(xì)胞及T細(xì)胞

  中國生物學(xué)家馬東初用GPⅡb/Ⅲa血小板單克隆抗體結(jié)合磁珠分離鑒定巨核細(xì)胞,可簡(jiǎn)單、快速地從人骨髓中獲得高純度巨核細(xì)胞,巨核細(xì)胞純度達(dá)87.5%~97.1%,大約50%的這些巨核細(xì)胞具有生物活性,且磁珠分離的巨核細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)保持完整,可用于巨核細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)方面的研究。生物學(xué)家戴碧濤等也用GPⅡb/Ⅲa(血小板膜糖蛋白)單克隆抗體分離和鑒定巨核細(xì)胞,經(jīng)涂片、染色和鏡下計(jì)數(shù)證實(shí)巨核細(xì)胞純度可達(dá)90%。該法分離的巨核細(xì)胞可作短期培養(yǎng)。與以往鑒定血液細(xì)胞的化學(xué)染色方法相比,免疫學(xué)方法具有特異性好、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn),可以提供更可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù),在細(xì)胞分類、細(xì)胞膜上受體及基因表達(dá)產(chǎn)物等分子生物學(xué)的研究方面提供了方便,給再生障礙性貧血、特發(fā)性血小板減少性紫癜以及巨核細(xì)胞有關(guān)疾病的發(fā)病機(jī)制及治療方面的研究提供了方便。國外生物專家Garlin nK等用抗CD3/抗CD28單克隆抗體包被的磁珠培養(yǎng)T細(xì)胞,結(jié)果表明該方法可獲得大量T細(xì)胞,為目前癌癥的細(xì)胞免疫療法提供了一個(gè)*的手段。

  2.用于檢測(cè)癌細(xì)胞和去除血液中癌細(xì)胞

  Makarovskiy等用免疫磁珠和RT-PCR(反轉(zhuǎn)錄-PCR)結(jié)合,檢測(cè)循環(huán)血液中前列腺癌細(xì)胞。以往單用RT-PCR有時(shí)出現(xiàn)假陽性或假陰性結(jié)果,采用免疫磁珠法初步富集后,再結(jié)合RT-PCR可在8ml血中檢測(cè)到少于10個(gè)的前列腺癌細(xì)胞。此外,Kongsard等采用免疫磁珠法除掉人類血液中癌細(xì)胞。在癌癥*中不采用自體輸血,因?yàn)榇嬖谠佥斎肽[瘤細(xì)胞的可能。該研究評(píng)價(jià)利用免疫磁珠從血液中去除癌細(xì)胞的效率,人的正常血液與兩個(gè)惡性細(xì)胞子(胸腺細(xì)胞PM1和MCF7)混合,血液經(jīng)過RC400TE白細(xì)胞膜,未經(jīng)過濾的樣品做對(duì)照。用IMB及克隆基因分析檢測(cè)惡性細(xì)胞,結(jié)果,經(jīng)過過濾的血液未發(fā)現(xiàn)有癌細(xì)胞。所以,作者認(rèn)為使用白細(xì)胞過濾膜使得癌癥患者的自體輸血成為安全、可行的。

  3.用于凍存血樣中細(xì)胞的分離,仍可獲得很好的效果

  Sleasman[7]從冷凍保存的血樣中純化單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞,使用單克隆抗體和免疫磁珠分離冷凍血中單核細(xì)胞,從健康人群及HIV(免疫缺陷)人群獲得的血樣冷凍保存18個(gè)月后,復(fù)蘇細(xì)胞,用免疫磁珠將細(xì)胞分為CD14+單核細(xì)胞CD14+T細(xì)胞亞群,經(jīng)流式細(xì)胞計(jì)數(shù)儀(FACS)分析顯示,免疫磁珠提取率>95%再利用抗CD4單克隆抗體和匹配的免疫磁珠提取,富集到的CD4+T細(xì)胞,分為亞型CD4+CD45RO和CD4+CD45RA,提取率均大于90%,對(duì)冷凍樣品有效地復(fù)蘇說明,IMB法可目標(biāo)性地選擇貯存樣品進(jìn)行目的分析。

  此外,Sedgwick[8]比較了用不連續(xù)密度梯度方法和IMB方法,分離外周血中啫酸性細(xì)胞的效果。比較兩種方法分離所得到的細(xì)胞的生物學(xué)活性,磁珠法分離得到的細(xì)胞有明顯生物學(xué)活性,刺激LTC4產(chǎn)量,且表達(dá)特殊細(xì)胞表面標(biāo)記物。在體外存活和粘附實(shí)驗(yàn)中兩種方法無明顯差別。作者分析原因,可能是磁珠分離時(shí)中性白細(xì)胞的干預(yù):相反,密度離心時(shí)啫酸性細(xì)胞暴露于葡聚糖離心液,可能影響下步細(xì)胞功能。困皮,在測(cè)試體外細(xì)胞功能時(shí),應(yīng)事先考慮不同方法分離后對(duì)細(xì)胞功能的影響。

 


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