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技術(shù)文章

免疫組化非特異性染色及控制方法

閱讀：670發(fā)布時間：2011-5-13

免疫組化非特異性染色及控制方法
 

一、非特異性染色的原因

1. Ig與Fc受體結(jié)合

多見于冰凍切片（特別是淋巴造血組織，淋巴細(xì)胞，單核細(xì)胞，組織細(xì)胞表面多），主要是和二抗反應(yīng)，因?yàn)橐豢挂话阆♂尪染^大，因此Fc受體的干擾基本不存在。由于福爾馬林固定破壞了大部分的Fc受體，所以石蠟切片不多見。

避免方法：

（1）用以二抗相同種族的正常血清封閉切片；

（2）用不含F(xiàn)c段的抗體，但價格貴。（V區(qū)，C1區(qū)不含F(xiàn)c段，用Pepsin消化）

2. 靜電吸附

抗體是一種帶負(fù)電荷的球蛋白，容易和帶正電荷的組織相結(jié)合，如膠原纖維。

避免方法：

（1）盡量稀釋一抗；

（2）降低抗體的電荷，如用2.5%NaCl，0.05mTBS代替PBS；

（3）用去垢劑如triton-100，Tween-20等處理切片。

3. 二抗與組織中的Ig結(jié)合

如羊抗兔的二抗，二抗可以標(biāo)本中（人）Ig發(fā)生交叉反應(yīng)，科學(xué)上越接近的動物，交叉反應(yīng)越明顯，如人與猴，兔與豚鼠。

避免方法：用與待測組織相同的5%的正常血清稀釋二抗。如人血清。

4. 組織中殘存醛基與Ig的結(jié)合

如醛類固定后未能*的沖洗，殘留醛基可以和Ig結(jié)合。

避免方法：

（1）*沖洗；

（2）0.02%的新鮮的硼氧化鉀液處理10分鐘后沖洗。

5. 內(nèi)源性過氧化物酶

紅細(xì)胞，粒細(xì)胞的含量尤其高，鏡下可以識別，不要將其當(dāng)成陽性結(jié)果。

避免方法：

（1）石蠟切片 0.3%雙氧水-甲醇溶液處理切片；

（2）冰凍切片 3%雙氧水處理切片5分鐘（99:1）因?yàn)槲唇?jīng)固定包埋，大部分酶未被破壞；

（3）對于骨髓涂片 用非過氧化物酶標(biāo)記的抗體

6. 內(nèi)源性*

以 24mg/ml的卵白素封片15分鐘。

 


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