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技術(shù)文章

人P27蛋白（P27）ELISA試劑盒的實驗原理

閱讀：567發(fā)布時間：2011-4-11

人P27蛋白（P27）ELISA試劑盒實驗原理

1． 采用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人P27蛋白（P27）ELISAKit水平。

2. 首先用純化的人P27蛋白（P27）ELISAKit抗體包被微孔板，制成固相抗體。

3. 然后往包被單抗的微孔中依次加入P27蛋白（P27）ELISAKit，再與HRP標(biāo)記的P27蛋白（P27）ELISAKit抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。

4. 顏色的深淺和樣品中的P27蛋白（P27）ELISAKit呈正相關(guān)。

5.  zui后用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出樣品中人P27蛋白（P27）ELISAKit濃度

。

目的：測定人的血清，血漿及相關(guān)液體樣本中P27蛋白（P27）ELISAKit的含量。

 

6. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。

7. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）去除顆粒。仔細(xì)收集上清，如有沉淀，再次離心。


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