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行業(yè)產(chǎn)品

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廣州艾迪基因科技有限責(zé)任公司


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DNA恒溫?cái)U(kuò)增試劑盒（熒光型）

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參   考   價(jià): ￥ 1600

訂  貨  量: ≥1 盒

具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)

產(chǎn)品型號(hào)WLE8202KIT

品       牌EDITX

廠商性質(zhì)生產(chǎn)商

所  在  地廣州市

聯(lián)系方式：蓋作啟查看聯(lián)系方式

更新時(shí)間：2023-09-21 15:24:29瀏覽次數(shù)：177次

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

DNA恒溫?cái)U(kuò)增試劑盒（熒光型）本試劑盒具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、反應(yīng)時(shí)間短（僅需20 min）等優(yōu)點(diǎn)，反應(yīng)組分為干粉狀態(tài)，操作簡(jiǎn)便，易于保存。

詳細(xì)介紹

【產(chǎn)品名稱(chēng)】

通用名稱(chēng)：DNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒（熒光型）

【包裝規(guī)格】

貨號(hào)：WLE8202KIT

規(guī)格：48份/盒

【原理概述】

本試劑盒基于一種常溫恒溫核酸快速擴(kuò)增技術(shù)：在常溫恒溫下，重組酶和引物形成蛋白/單鏈核苷酸的復(fù)合體Rec/ssDNA，在輔助蛋白和單鏈結(jié)合蛋白SSB的幫助下，侵入雙鏈DNA模板；在侵入位點(diǎn)形成D-loop區(qū)域，并開(kāi)始對(duì)DNA雙鏈進(jìn)行掃描；待找到與引物互補(bǔ)的目的區(qū)域后，復(fù)合體Rec/ssDNA解體的同時(shí)，聚合酶也結(jié)合到引物的3’末端，開(kāi)始鏈的延伸。本試劑盒在39 oC下，依賴(lài)核酸外切酶的作用，加入根據(jù)模板設(shè)計(jì)的特異的分子探針，使用熒光監(jiān)測(cè)設(shè)備能實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)片段擴(kuò)增過(guò)程的實(shí)時(shí)監(jiān)控。

【產(chǎn)品特點(diǎn)】

本試劑盒具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、反應(yīng)時(shí)間短（僅需20 min）等優(yōu)點(diǎn)，反應(yīng)組分為干粉狀態(tài)，操作簡(jiǎn)便，易于保存。

可適用于各種品牌的熒光定量PCR儀、恒溫?zé)晒鈹U(kuò)增儀器等熒光檢測(cè)設(shè)備。

【引物設(shè)計(jì)】

建議使用長(zhǎng)度在30-35 bp的引物，引物過(guò)短會(huì)影響擴(kuò)增速度和檢測(cè)靈敏度；引物設(shè)計(jì)避免形成二級(jí)結(jié)構(gòu)而影響擴(kuò)增；擴(kuò)增子長(zhǎng)度建議在150-300 bp，通常不超過(guò)500 bp。

 

【熒光探針設(shè)計(jì)】

探針序列不與特異性引物識(shí)別位點(diǎn)重疊，長(zhǎng)度為46-52 nt，序列避免回文序列、內(nèi)部二級(jí)結(jié)構(gòu)和連續(xù)的重復(fù)堿基。探針共有四個(gè)修飾位點(diǎn)：距離5’端的≥ 35 nt的中部位置標(biāo)記一個(gè)dSpacer（四氫呋喃，THF），作為核酸外切酶的識(shí)別位點(diǎn)；THF位點(diǎn)的上游標(biāo)記一個(gè)熒光基團(tuán)，下游標(biāo)記一個(gè)粹滅基團(tuán)，兩個(gè)基團(tuán)的間距為2-4 nt；THF距離3’末端≥15 nt，并且3’末端標(biāo)記一個(gè)修飾基團(tuán)，例如胺基、磷酸基團(tuán)或C3-Spacer。

【試劑盒組成】

組成

含量

A buffer

1.6 mL×1管

B buffer

150 μL×1管

正對(duì)照模板

30 μL×1管

正對(duì)照引物探針Mix

70 μL×1管

試劑

48份

使用說(shuō)明書(shū)

1份

【試劑盒儲(chǔ)存】

1．運(yùn)輸溫度：≤ 20 oC的恒溫環(huán)境；

2．儲(chǔ)存條件：儲(chǔ)存溫度 ≤ -20 °C（± 5 °C）恒溫環(huán)境，避光保存，避免重壓、反復(fù)凍融；

3．產(chǎn)品有效期：14個(gè)月；

4．生產(chǎn)日期見(jiàn)外包裝。

【操作步驟】

提前30分鐘將試劑盒所需組分取出，室溫融化，震蕩混勻。

(1) 每個(gè)干粉反應(yīng)管加入29.4 μL A buffer（注意：A buffer需融化混勻，否則會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)效果產(chǎn)生影響）；

(2) 每個(gè)反應(yīng)管分別加入2 μL上游引物、  2 μL下游引物和0.6 μL探針（引物和探針濃度為10 μM，對(duì)于多個(gè)反應(yīng)、步驟1和步驟2可以混合后再分裝至反應(yīng)管中）；

(3) 向反應(yīng)管中依次加入2 μL ~ 13.5 μL核酸模板（可根據(jù)實(shí)際需求調(diào)整加入模板的體積，并相應(yīng)調(diào)整加入ddH2O體積，至模板與ddH2O總體積為13.5 μL）；

(4) 最后向反應(yīng)管中加入2.5 μL B buffer并充分混合（請(qǐng)務(wù)必上下顛倒甩動(dòng)反應(yīng)管8-10次進(jìn)行混勻；對(duì)于多個(gè)反應(yīng)，建議將B buffer加至反應(yīng)管的蓋子內(nèi)側(cè)上下顛倒后混勻）；

(5) 混勻后，將反應(yīng)液甩（或快速離心）至管子底部，然后立即將反應(yīng)管放入熒光檢測(cè)設(shè)備中。熒光檢測(cè)程序設(shè)置為：恒溫39 oC；每30 s采集一次FAM通道（信號(hào)采集通道的選擇與熒光探針設(shè)計(jì)一致）熒光值；反應(yīng)時(shí)間20 min。

注：如使用ABI系列PCR儀，請(qǐng)務(wù)必于passive reference和quencher處均選擇“none"。

體系配制

組分

體積（μL）

A buffer

29.4

上游引物(10 μM)*

2

下游引物(10 μM)*

2

探針(10 μM)*

0.6

ddH2O和DNA模板

13.5

B buffer

2.5

總體積

50

 

 

*正對(duì)照反應(yīng)單元體系配制：正對(duì)照模板加入2 μL，加入4.6 μL正對(duì)照引物探針Mix（已包含探針和上/下游引物），其他組分參照體系配制。

正對(duì)照熒光結(jié)果圖

圖1. P：正對(duì)照；N：陰性對(duì)照

【注意事項(xiàng)】

1．由于試劑盒靈敏度非常高，在進(jìn)行反應(yīng)時(shí)請(qǐng)注意避免核酸污染，并設(shè)置空白對(duì)照；

2．使用時(shí)請(qǐng)取出實(shí)驗(yàn)所需的MIRA反應(yīng)單元的數(shù)量，剩余部分請(qǐng)置于存儲(chǔ)條件下。

 



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