RT-PCR代測(cè)服務(wù)：逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（Reverse transcription PCR，RT-PCR），是將RNA的反轉(zhuǎn)錄（RT）和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增（PCR）相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，利用變性，退火和延伸多步驟、多循環(huán)來擴(kuò)增目的DNA片段。在該反應(yīng)過程中，目的DNA產(chǎn)量呈指數(shù)增長，使一些極為微量RNA樣品檢測(cè)成為可能。與其他RNA分析技術(shù)如，Northern印跡、RNase保護(hù)分析、原位雜交及S1核酸酶等相比，RT-PCR具有更靈敏、便捷、價(jià)廉、易于操作等多重優(yōu)勢(shì)，已成為初步檢測(cè)基因轉(zhuǎn)錄水平差異變化的實(shí)驗(yàn)方法之一，廣泛應(yīng)用于細(xì)胞基因表達(dá)、RNA病毒含量測(cè)定和克隆特定基因的cDNA序列等諸多方面。

RT-PCR代測(cè)服務(wù)基本步驟：
● 模板制備：RNA抽提。
● 引物合成：客戶提供上、下游引物，或者我公司提供免費(fèi)的引物設(shè)計(jì)及合成（包括RT-PCR半定量檢測(cè)中的內(nèi)參引物）。
● 反轉(zhuǎn)錄為cDNA
● PCR擴(kuò)增
● 產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖電泳后進(jìn)行灰度掃描分析

RT-PCR代測(cè)服務(wù)服務(wù)須知：
1. 您可自備引物，亦可委托我們?cè)O(shè)計(jì)合成（費(fèi)用由客戶承擔(dān)）。自備引物必須是PAGE純化的高質(zhì)量的干粉，我們不接受已溶解的引物。
2. 樣本要求：盡可能新鮮
3. 樣本量：組織樣本，質(zhì)量≥150mg；細(xì)胞樣本，細(xì)胞數(shù)≥1×107。
4. 我公司不接受您提供的RNA樣品，除非您有足夠的證據(jù)證明所提供的RNA沒有問題。
5. 服務(wù)時(shí)限和內(nèi)容：收到樣本之日起20-30個(gè)工作日內(nèi)提交實(shí)驗(yàn)結(jié)果，具體包括實(shí)驗(yàn)方法、步驟、所用試劑、儀器、圖片及相關(guān)分析數(shù)據(jù)等；
6.報(bào)告送達(dá)：實(shí)驗(yàn)結(jié)果將以電子或書面形式提交給您。

RT-PCR代測(cè)服務(wù)樣本制備及注意事項(xiàng):
1.懸浮細(xì)胞： 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)液倒入離心管中，離心沉淀細(xì)胞，棄去上清液。加入1ml PBS懸浮細(xì)胞，轉(zhuǎn)入小離心管中，低速離心沉淀細(xì)胞，棄去PBS，將細(xì)胞沉淀（1×107個(gè)細(xì)胞）放入-70℃ 冰箱保存。干冰運(yùn)輸。也可以在細(xì)胞沉淀中加入1ml的 Trizol 裂解液反復(fù)吸打幾次，目視可見細(xì)胞層溶解*后，-70℃保存效果更佳。
2.貼壁細(xì)胞：取大約1×107個(gè)貼壁細(xì)胞，胰酶消化后加入PBS懸浮細(xì)胞，低速離心收集，棄去液體，加入 1 ml PBS懸浮細(xì)胞，轉(zhuǎn)入小離心管中，低速離心沉淀細(xì)胞，棄去PBS，放入-70℃冰箱保存。干冰運(yùn)輸。也可以在細(xì)胞沉淀中加入1ml的 Trizol 裂解液反復(fù)吸打幾次，目視可見細(xì)胞層溶解*后，-70℃保存效果更佳。
3.組織：采集新鮮組織（注意：生物體死亡后1分鐘內(nèi)取材料并保存好），組織塊以PBS或生理鹽水清洗干凈，切為小塊，放入液氮或-70℃冰箱中保存，干冰運(yùn)輸。也可每 50-100 mg 組織加1 ml Trizol溶液勻漿裂解組織樣品。勻漿的裂解液4℃ 短期保存（1個(gè)月）。-20℃或-70℃長期保存。

RT-PCR代測(cè)服務(wù)特別提醒：
1.因RNA易出現(xiàn)降解，建議將標(biāo)本加Trizol后運(yùn)輸。
2.實(shí)驗(yàn)所需要的取材工具以及組織存放器皿等必須經(jīng)過無菌無酶高溫滅菌處理。
3.取材實(shí)驗(yàn)環(huán)境要求無RNA酶污染。
4.如有特別要求，請(qǐng)與服務(wù)該區(qū)域的*講明