一、 樣品準備
1. 準備好25cm2細胞培養(yǎng)瓶或60mm細胞培養(yǎng)皿的待測培養(yǎng)細胞(1至5 X 106細胞)
2. 小心加入xx毫升GENMED清理液（Reagent A），覆蓋生長表面
3. 小心抽去清理液
4. 使用細胞刮脫棒輕柔刮脫細胞(注意：可以使用胰l酶消化)
5. 加入xx毫升GENMED清理液（Reagent A），混勻細胞
6. 移入到預冷的15毫升錐形離心管(注意：懸浮細胞從這一步驟開始)
7. 放進4℃臺式離心機離心5分鐘，速度為300g
8. 小心抽去上清液
9. 加入xx微升GENMED裂解液（Reagent B），充分混勻
10. 轉(zhuǎn)移到預冷的1.5毫升離心管
11. 強力渦旋震蕩15秒
12. 置于冰槽里孵育30分鐘
13. 放進4℃微型臺式離心機離心5分鐘，速度為16000g(或13000RPM，例如eppendorf 5415)
14. 小心移取500微升上清液到新的預冷的1.5毫升離心管
15. 移取10微升進行蛋白定量檢測(注意：建議使用GENMED Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒-GMS30030.1)
16. 即刻放進-70℃保存或置于冰槽里繼續(xù)后續(xù)操作
二、 測定準備
1. 開啟并設(shè)定好分光光度儀(溫度為25℃)：波長340nm，間隔60秒，讀數(shù)5次(共5分鐘)，并置零
2. 從-20℃冰箱里取出試劑，置于冰槽里融化；GENMED底物液（Reagent E）避免光照；GENMED緩沖液（Reagent C）置于室溫下均衡溫度
三、 背景對照測定
1. 移取xx微升GENMED緩沖液（Reagent C）到新的比色皿
2. 加入xx微升GENMED反應(yīng)液（Reagent D）
3. 加入xx微升GENMED底物液（Reagent E）
4. 在25℃溫度下孵育3分鐘
5. 加入xx微升GENMED陰性液（Reagent F）
6. 上下傾倒數(shù)次，混勻(限定在3秒之內(nèi))
7. 即刻放進分光光度儀檢測，此為背景空對照(5分鐘讀數(shù)-0分鐘讀數(shù))
四、 樣品總活性測定
1。 移取xx微升GENMED緩沖液（Reagent C）到新的比色皿
2. 加入xx微升GENMED反應(yīng)液（Reagent D）
3. 加入xx微升GENMED底物液（Reagent E）
4. 在25℃溫度下孵育3分鐘
5. 加入20微升待測樣品(或50微克蛋白)(注意：樣品須清澈)
6. 上下傾倒數(shù)次，混勻(限定在3秒之內(nèi))
7. 即刻放進分光光度儀檢測，此為樣品讀數(shù)(5分鐘讀數(shù)-0分鐘讀數(shù))
五、 樣品非特異活性測定
1. 移取xx微升GENMED緩沖液（Reagent C）到新的比色皿
2. 加入xx微升GENMED專性液（ReagentG）
3. 加入20微升待測樣品(或50微克蛋白)(注意：樣品須清澈)
4. 上下傾倒數(shù)次，混勻
5. 在25℃溫度下孵育10分鐘
6. 加入xx微升GENMED緩沖液（Reagent C）
7. 加入xx微升GENMED反應(yīng)液（Reagent D）
8. 加入xx微升GENMED底物液（Reagent E）
9. 上下傾倒數(shù)次，混勻(限定在3秒之內(nèi))
10. 即刻放進分光光度儀檢測，此為樣品讀數(shù)(5分鐘讀數(shù)-0分鐘讀數(shù))
