綿羊絲狀支原體抗體（M-MycoplasmalAb）試劑盒（ELISA）使用說(shuō)明書
? 本試劑盒用于體外定性檢測(cè)血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中綿
羊絲狀支原體抗體（M-MycoplasmalAb）。
? 有效期：6個(gè)月
? 保存條件：2-8℃
實(shí)驗(yàn)原理
試劑盒采用間接法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。由于抗體產(chǎn)生量一般比較大，為避免HOOK
效應(yīng)，試劑盒采用兩步法。往預(yù)先包被綿羊絲狀支原體抗體（M-MycoplasmalAb）捕獲抗原的
包被微孔中，依次加入標(biāo)本、陰性和陽(yáng)性對(duì)照，經(jīng)過(guò)溫育并*洗滌，再加入HRP標(biāo)記的檢測(cè)
抗體，經(jīng)過(guò)溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在
酸 的 作 用 下 轉(zhuǎn) 化 成 最 終 的 黃 色 。 顏 色 的 深 淺 和 樣 品 中 的 綿 羊 絲 狀 支 原 體 抗 體
（M-MycoplasmalAb）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），判定陰陽(yáng)性。
樣本處理及要求
1. 血清：將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜，然后1000×g離心20
分鐘，取上清即可，或?qū)⑸锨逯糜?/span>-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2. 血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本，并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000
×g離心15分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?/span>-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3. 組織勻漿：用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細(xì)胞
會(huì)影響測(cè)量結(jié)果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對(duì)應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量體
積比，比如1g的組織樣品對(duì)應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記錄。
推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組
織細(xì)胞，可以對(duì)勻漿液進(jìn)行超聲破碎，或反復(fù)凍融。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，
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取上清檢測(cè)。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：請(qǐng)1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯?
于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
注：標(biāo)本溶血會(huì)影響最后檢測(cè)結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。
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