花菁染料CY3.5標(biāo)記膠原蛋白V型，CY3.5-Collagen-v的合成及純化過(guò)程

花菁染料CY3.5標(biāo)記膠原蛋白V型是一種將高靈敏度熒光染料Cy3.5共價(jià)連接于膠原蛋白V型（Collagen type V）分子的技術(shù)，為生物成像、蛋白質(zhì)追蹤及組織工程提供了強(qiáng)有力的工具。該標(biāo)記物保持了膠原蛋白的生物活性，同時(shí)賦予其優(yōu)異的熒光性能。

合成步驟主要基于Cy3.5-NHS酯與膠原蛋白中的賴氨酸側(cè)鏈氨基發(fā)生酰胺鍵偶聯(lián)反應(yīng)。具體過(guò)程如下：

膠原蛋白預(yù)處理：將膠原蛋白V型溶解于適宜緩沖液中（通常為pH 7.4的PBS緩沖液），濃度控制在1-5 mg/mL范圍內(nèi)，確保蛋白質(zhì)處于穩(wěn)定的溶液狀態(tài)。

染料溶解與準(zhǔn)備：將Cy3.5-NHS酯溶解于干燥的二甲基亞砜（DMSO）或N,N-二甲基甲酰胺（DMF）中，濃度一般為1-10 mM，保證染料溶解且活性保持。

偶聯(lián)反應(yīng)：緩慢將Cy3.5-NHS酯溶液加入膠原蛋白溶液中，控制染料與蛋白摩爾比（常用1:10至1:20），在4°C或室溫條件下，避光攪拌反應(yīng)8-24小時(shí)。弱堿性環(huán)境有利于酰胺鍵形成，常調(diào)節(jié)pH至7.8-8.5。

反應(yīng)終止及純化：反應(yīng)結(jié)束后，采用透析法（分子量截?cái)嗑€約10 kDa）在PBS緩沖液中多次更換透析液，以去除未反應(yīng)的游離染料及低分子雜質(zhì)。透析時(shí)間通常24-48小時(shí)，保證純度。

進(jìn)一步純化：為提高產(chǎn)物純度，可使用凝膠過(guò)濾色譜（如Sephadex G-25或G-50）分離標(biāo)記蛋白與游離染料，確保染料均勻結(jié)合且蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)完整。

質(zhì)量檢測(cè)：通過(guò)紫外-可見(jiàn)吸收光譜測(cè)定標(biāo)記效率，熒光光譜檢測(cè)熒光特性。SDS-PAGE結(jié)合熒光成像確認(rèn)標(biāo)記的蛋白質(zhì)大小和均一性，同時(shí)檢測(cè)是否有降解或交聯(lián)發(fā)生。

產(chǎn)品名稱：花菁染料CY3.5標(biāo)記膠原蛋白V型，CY3.5-Collagen-v

純度：95%+

性狀：基于不同的分子量，呈白色 / 類白色固體，或液體。

溶劑：溶于二氯甲烷、DMSO、水等常規(guī)有機(jī)溶劑。

儲(chǔ)藏條件：-20°C干燥避光保存

包裝規(guī)格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

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僅供科研，不能用于人體實(shí)驗(yàn)AXC.2025.05.23