點(diǎn)擊化學(xué)“DBCO/TCO/TZ”在中藥活性成分靶點(diǎn)鑒定中的特點(diǎn)及方法

近年來，基于在結(jié)構(gòu)性、功能多樣性以及生物相容性等方面具有的特點(diǎn)，源于中藥活性成分的科研已在臨床應(yīng)用于，如性、心和惡性等，在新藥及臨床用藥中占據(jù)重要[2]。其中中藥活性成分的靶點(diǎn)研究是重要環(huán)節(jié)。中藥活性分子與細(xì)胞內(nèi)靶標(biāo)相互作用，是其發(fā)揮功效的基礎(chǔ)，明確其體內(nèi)作用靶點(diǎn)，有助于藥理機(jī)制的闡明及副作用的盡早發(fā)現(xiàn)，進(jìn)而指導(dǎo)科研化學(xué)工作者在分子結(jié)構(gòu)上進(jìn)行針對(duì)性的優(yōu)化改造，有利于科研的性及性，推動(dòng)中藥的化與現(xiàn)代化。主要綜述了近年來點(diǎn)擊化學(xué)（click chemistry）在中藥活性成分靶點(diǎn)鑒定應(yīng)用方面的研究進(jìn)展。

1.“點(diǎn)擊化學(xué)”在中藥活性成分靶點(diǎn)鑒定中的特點(diǎn)

截至目前，小分子親和色譜（small molecule affinity chromatography）及基于活性組分析（activity-based protein profiling，ABPP）是應(yīng)用的中藥活性成分及其他產(chǎn)物靶點(diǎn)鑒定中的常用策略。“

靶點(diǎn)鉤釣”是基于小分子親和色譜法的常用方法，是指基于科研分子可與發(fā)生共價(jià)結(jié)合的原理，將科研分子通過化學(xué)反應(yīng)連接到生物相容的惰性樹脂（磁珠或瓊脂糖凝膠）上，基于該樹脂來釣取能與科研分子發(fā)生相互作用的，后經(jīng)凝膠電泳分離純化，高分辨質(zhì)譜分析，進(jìn)而確定該科研分子的靶蛋白。利用該，一系列中藥活性成分的靶點(diǎn)被成功鑒定，例如，Tu課題組分別構(gòu)建了蘇木酮A探針[10]及野菊花內(nèi)酯探針[11]，依次鑒定出蘇木酮A的作用靶點(diǎn)為肌苷5-磷酸脫氫酶2（IMPDH2），菊花內(nèi)酯發(fā)揮作用的靶點(diǎn)蛋白為熱休克蛋白70（HSP70），從靶點(diǎn)源頭上揭示了中藥活性成分的作用機(jī)制。

“靶點(diǎn)鉤釣”策略是一種可操作性強(qiáng)的靶點(diǎn)鑒定，有力推動(dòng)了中藥藥理機(jī)制的闡明，加快了中藥現(xiàn)代化進(jìn)程。該策略使用過程中如需引入位阻較大的親和標(biāo)簽，則可能導(dǎo)致化合物的活性降低甚至喪失。隨著生物正交化學(xué)反應(yīng)的發(fā)展，由Sharpless于2001年提出的銅催化的疊氮-炔點(diǎn)擊反應(yīng)（click reaction）使這一問題得到了緩解，成為近年來應(yīng)用、研究的基于活性組分析的靶點(diǎn)鑒定策略之一。

點(diǎn)擊化學(xué)又稱“鏈接化學(xué)”或“動(dòng)態(tài)組合化學(xué)”，旨在通過小單元的拼接，來、地完成類型分子的化學(xué)合成。該反應(yīng)強(qiáng)調(diào)開辟以碳-雜原子鍵（C-X-C）合成為基礎(chǔ)的組合化學(xué)新方法，其反應(yīng)為銅催化的疊氮-炔基的環(huán)加成反應(yīng)。點(diǎn)擊化學(xué)反應(yīng)有如下特點(diǎn)：

（1）可在細(xì)胞內(nèi)發(fā)生，利于原位直接找到科研作用靶點(diǎn)；

（2）合成反應(yīng)、副產(chǎn)物對(duì)細(xì)胞害；

（3）操作簡(jiǎn)單、條件溫和、對(duì)水與氧等環(huán)境不敏感?？茖W(xué)家們通過有機(jī)合成的方式在活性分子上引入炔烴等生物正交基團(tuán)，在不影響其藥理活性的前提下合成得到功能化衍生物，隨后將該功能化衍生物與細(xì)胞共孵育，使其與靶標(biāo)蛋白結(jié)合，后利用點(diǎn)擊反應(yīng)再將疊氮修飾的報(bào)告基團(tuán)（或熒光）連接到探針-靶標(biāo)蛋白復(fù)合物上，進(jìn)而對(duì)靶標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)、富集和鑒定（圖1）。

 2.基于點(diǎn)擊化學(xué)進(jìn)行靶點(diǎn)鑒定的具體步驟與方法

采用點(diǎn)擊化學(xué)的方式進(jìn)行靶點(diǎn)鑒定，通常需要3個(gè)步驟，具體包括：

（1）小分子探針的設(shè)計(jì)與合成，隨后將該探針與細(xì)胞共孵育后實(shí)現(xiàn)與靶蛋白的某些位點(diǎn)發(fā)生共價(jià)結(jié)合；

（2）通過點(diǎn)擊化學(xué)反應(yīng)，將已與靶蛋白發(fā)生共價(jià)結(jié)合的分子探針與報(bào)告基團(tuán)相連（圖2）；

（3）對(duì)所識(shí)別的靶標(biāo)進(jìn)行純化、富集和鑒定。

DBCO-PEG衍生物產(chǎn)品：

DBCO-PEG-Streptavidins 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-鏈霉親和素

DBCO-PEG-Heparin 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-肝素

DBCO-PEG-Concanavalin A 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-刀豆球蛋白

DBCO-PEG-Catalase 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-過氧化氫酶

DBCO-PEG-Insulin 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-胰島素

DBCO-PEG-Casein 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-絡(luò)蛋白

DBCO-PEG-Ovalbumin 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-卵清蛋白

DBCO-PEG-Lectins 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-凝集素

DBCO-PEG-Dextran 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-葡聚糖

DBCO-PEG-DEX 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-葡聚糖

DBCO-PEG-alginate 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-海藻酸鈉

DBCO-PEG-Chitosan 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-殼聚糖

DBCO-PEG-Cs 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-殼聚糖

DBCO-PEG-galactose 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-半乳糖

DBCO-PEG-mannose 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-甘露糖

DBCO-PEG-Glucose 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-葡萄糖

DBCO-PEG-Cellobiose 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-纖維二糖

DBCO-PEG-Lentinan 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-香菇多糖

DBCO-PEG-HRP 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-辣根過氧化氫酶

DBCO-PEG-MTX 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-甲氨蝶呤

DBCO-PEG-PTX 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-紫杉醇

DBCO-PEG-Doxorubicin 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-阿霉素

DBCO-PEG-DOX 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-阿霉素

DBCO-PEG-CPT 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-喜樹堿

DBCO-PEG-Ad 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-金剛烷

DBCO-PEG-RGD 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-RGD

DBCO-PEG-cRGD 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-cRGD

DBCO-PEG-TAT 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-TAT

FITC-PEG-DBCO 熒光素-聚乙二醇-二苯并環(huán)辛炔

DBCO-PEG-Acetylthio 二苯并環(huán)辛炔-聚乙二醇-乙酰硫基

DBCO-PEG-Vinylsulfone 二苯并環(huán)辛炔-聚乙二醇

DBCO-PEG-Valeric Acids 二苯并環(huán)辛炔-聚乙二醇-戊酸

DBCO-PEG-Chloride 二苯并環(huán)辛炔-聚乙二醇-氯化物

DBCO-PEG-SAS 二苯并環(huán)辛炔-聚乙二醇-琥珀酰亞胺琥珀酰亞胺酯

DBCO-PEG-Tosylate 二苯并環(huán)辛炔-聚乙二醇-對(duì)甲苯磺酸

DBCO-PEG-Iodoacetate 二苯并環(huán)辛炔-聚乙二醇-乙?；?/font>

DBCO-PEG-Lipoic acid 氮雜二苯并環(huán)辛炔-聚乙二醇-硫辛酸

DBCO-PEG-SVA 氮雜二苯并環(huán)辛炔-聚乙二醇-琥珀酰亞胺戊酸酯

DBCO-PEG-AC 氮雜二苯并環(huán)辛炔-聚乙二醇-丙烯酸酯

DSPE-PEG4-DBCO 二硬脂?；字０?/font>-四聚乙二醇-二苯基環(huán)辛決

DBCO-S-S-PEG3-Biotin二苯基環(huán)辛炔-雙硫鍵-三聚乙二醇-

DBCO-PEG-acid 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-磷酸

DBCO-PEG-PFP 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-五氟苯酚

DBCO-PEG-Benzaldehyde 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇

DBCO-PEG-Mesylate 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-甲磺酸酯

DBCO-PEG-TPP 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-磷酸三苯酯

DBCO-SS-PEG-Dopamine 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-多巴胺

DBCO-PEG-Ferrocene 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-二茂鐵

DBCO-SS-PEG-GA 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-甘草次酸

DBCO-PEG-Cyclodextrin 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-環(huán)糊精

DBCO-PEG-SS-CD 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-環(huán)糊精

DBCO-PEG-GPC 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-甘磷酸膽堿

DBCO-PEG-SPDP 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-3-(2-吡啶二硫代)丙酸N-羥基琥珀酰亞胺酯

DBCO-SS-PEG-DOTA 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-四氮雜環(huán)十二烷四乙酸

DBCO-PEG-NOTA 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-NOTA

DBCO-PEG-DTPA 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-二乙基三胺五乙酸

DBCO-PEG-TRITC 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-四甲基羅丹明

DBCO-PEG-6-FAM 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-6-羧甲基熒光素

DBCO-PEG-FITC 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-異硫氰基熒光素

DBCO-PEG-CY3 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-菁染料

DBCO-PEG-CY5 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-菁染料

DBCO-PEG-CY5.5 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-菁染料

DBCO-PEG-CY7 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-菁染料

DBCO-PEG-CY7.5 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-菁染料

DBCO-PEG-Rhodamine B 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-羅丹明B

DBCO-PEG-ICG 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-吲哚菁綠

DBCO-PEG-Comarin 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-香豆素

DBCO-PEG-Bodipy 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-氟化硼二吡咯

DBCO-PEG-BDP 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-氟化硼二吡咯

DBCO-PEG-HMME 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-血卟啉單甲醚

DBCO-PEG-Ce6 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-二氫卟吩

DBCO-PEG-DSPE 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-二硬脂?；字０?/font>

DBCO-PEG-DPPE 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-二棕櫚?；字０?/font>

DBCO-PEG-DOPE 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-二油?；字０?/font>

DBCO-PEG-DMPE 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-二肉豆蔻酰基磷脂酰胺

DBCO-PEG-DLPE 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-二月桂?；字０?/font>

DBCO-PEG-Cholesterol 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-

DBCO-PEG-DMG 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-二肉豆蔻酰-sn-甘油

DBCO-PEG-DPG 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-雙棕櫚酸甘油酯

DBCO-PEG-DPPS 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-二棕櫚酰磷脂酰

DBCO-PEG-BSA 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-牛血清白蛋白

DBCO-PEG-HAS 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-人血清白蛋白

DBCO-PEG-Transferrin 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-轉(zhuǎn)鐵蛋白

DBCO-PEG-TF 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-轉(zhuǎn)鐵蛋白

DBCO-PEG-WGA 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-小麥胚凝集素

DBCO-PEG-NH2 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-氨基

DBCO-PEG-Amine 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-氨基

DBCO-PEG-COOH 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-羧酸

DBCO-PEG-carboxyl 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-羧酸

DBCO-PEG-MAL 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-馬來酰亞胺

DBCO-PEG-Maleimide 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-馬來酰亞胺

DBCO-PEG-NHS 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-N-羥基琥珀酰亞胺

DBCO-PEG-N3 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-疊氮

DBCO-PEG-azide 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-疊氮

DBCO-PEG-Alkyne 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-炔基

DBCO-PEG-SH 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-炔基

DBCO-PEG-Thiol 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-炔基

DBCO-PEG-Biotin 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-

DBCO-PEG-CHO 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-醛基

DBCO-PEG-aldehyde 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-乙醛

DBCO-PEG-SS-OPSS 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-鄰吡啶二硫 巰基吡啶

DBCO-PEG-OH 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-羥基

DBCO-PEG-hydroxyl 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-羥基

DBCO-PEG-Hydrazide 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-酰基

DBCO-PEG-HZ 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-?；?/font>

DBCO-SS-PEG-Silane 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-硅烷

DBCO-PEG-Acrylates 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-丙烯酸酯

DBCO-PEG-ACRL 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-丙烯酸酯

DBCO-PEG-LA 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-硫辛酸

DBCO-PEG-Tosyl 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-甲苯磺酸酯

DBCO-PEG-Aminooxy 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-氨甲基

DBCO-PEG-NPC 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-硝基苯碳酸鹽

DBCO-PEG-Epoxides 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-環(huán)氧化物

DBCO-PEG-EPOX 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-環(huán)氧化物

DBCO-PEG-Acrylamide 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-丙烯酰胺

DBCO-PEG-Bromide 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-溴化物

DBCO-PEG-Br 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-溴化物

DBCO-PEG-Methacrylate 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-甲基丙烯酸酯

DBCO-PEG-MA 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-甲基丙烯酸酯

DBCO-PEG-DBCO 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-二苯基環(huán)辛炔

DBCO-PEG-TCO 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-TCO

DBCO-PEG-TZ 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-四嗪

DBCO-PEG-Tetrazine 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-四嗪

DBCO-PEG-Folate 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-

DBCO-PEG-FA 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-

DBCO-PEG-CHEMS 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-半琥珀酸

DBCO-PEG-Phenyl 二苯基環(huán)辛炔-聚乙二醇-苯基

 溫馨提示：西安齊岳生物科技有限公司供應(yīng)的產(chǎn)品用于科研，不能用于其他用途，axc,2020.04.09