胎牛血清用途及相關(guān)知識詳解?

　　血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物，其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚，且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、激素、無機(jī)物等，這些物質(zhì)對促進(jìn)細(xì)胞生長或抑制生長活性是達(dá)到生理平衡的。

　　胎牛血清(FBS)是常用的血清添加劑，因為它富含生長因子、蛋白和大分子。盡管無血清和非動物來源的培養(yǎng)基也逐漸走紅，但許多細(xì)胞系未必適用，并且存在費(fèi)用較高和生長較慢等缺點(diǎn)。那么，研究人員在評估FBS的質(zhì)量時，需要考慮哪些標(biāo)準(zhǔn)呢?

　　對于細(xì)胞培養(yǎng)而言，血清的重要性不言而喻。它含有蛋白、生長因子、氨基酸、脂類、碳水化合物、維生素及其他組分，可以促進(jìn)貼壁或懸浮細(xì)胞的生長和維持。胎牛血清(FBS)是常用的血清添加劑，因為它富含生長因子、蛋白和大分子。盡管無血清和非動物來源的培養(yǎng)基也逐漸走紅，但許多細(xì)胞系未必適用，并且存在費(fèi)用較高和生長較慢等缺點(diǎn)。

　　胎牛血清應(yīng)取自剖腹產(chǎn)的胎牛;新牛血清取自出生24小時之內(nèi)的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。胎牛血清是高的，因為胎牛還未接觸外界，血清中所含的抗體、補(bǔ)體等對細(xì)胞有害的成分少。

　　胎牛血清要求：

　　1、性狀、外觀：淺黃色澄清、無溶血、無異物稍粘稠液體。

　　2、蛋白質(zhì)含量：3.5%~5.0%( w/v)

　　3、血紅蛋白含量：≤ 0.02%( w/v)

　　4、無菌檢驗：陰性

　　5、支原體檢驗：陰性

　　6、細(xì)菌內(nèi)毒素：≤5(EU/ml)

　　7、牛腹瀉病毒：陰性

　　8、大腸桿菌噬菌體：陰性

　　9、支持細(xì)胞增殖：(Sp2/0-Ag14) 生長曲線 (接種濃度)大增殖濃度 ≥2.5×106個/ml，細(xì)胞倍增時間：≤15h，克隆率：≥85%

　　胎牛血清有什么用途

　　胎牛血清是一種性狀、外觀 淺黃色澄清、無溶血、無異物稍粘稠液體。胎牛血清應(yīng)取自剖腹產(chǎn)的胎牛;新牛血清取自出生24小時之內(nèi)的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。顯然，胎牛血清是品質(zhì)高的，因為胎牛還未接觸外界，血清中所含的抗體、補(bǔ)體等對細(xì)胞有害的成分少。

　　新生牛血清應(yīng)無細(xì)菌、支原體污染。血清中含有細(xì)菌會直接造成細(xì)胞污染、制品污染，因此無菌是基本的要求。另外細(xì)菌會產(chǎn)生內(nèi)毒素，也稱脂多糖。內(nèi)毒素可以引起發(fā)熱反應(yīng)、白細(xì)胞反應(yīng)、代謝性酸中毒、感染性休克、彌散性血管內(nèi)凝血(DIC)。人及哺乳動物對內(nèi)毒素異常敏感，疫苗中的內(nèi)毒素含量高會引起人及動物的強(qiáng)烈反應(yīng)，甚至被致死。所以生物制品及其原輔料對內(nèi)毒素要求嚴(yán)格控制。按鱟試劑或內(nèi)毒素檢測儀操作程序測定，新生牛血清中的細(xì)菌內(nèi)毒素含量應(yīng)低于10EU/mL。

　　有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合，起到解毒作用。

　　是細(xì)胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來源。

　　提供結(jié)合蛋白，能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等，能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。

　　起酸堿度緩沖液作用。

　　提供蛋白酶抑制劑，使在細(xì)胞傳代時使剩余胰蛋白mei失活，保護(hù)細(xì)胞不受傷害。

　　提供對維持細(xì)胞指數(shù)生長的激素，基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物，以及主要的低分子營養(yǎng)物。

　　細(xì)胞增殖高質(zhì)量的血清含有豐富的細(xì)胞生長必需的營養(yǎng)成分，它提供細(xì)胞貼壁所需的因子，還起著緩沖酸堿度、提供解毒、保護(hù)細(xì)胞不受傷害等作用。用Sp2/0小鼠骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞增殖試驗測定標(biāo)準(zhǔn)血清(胎牛血清)的絕對克隆形成率和新生牛血清的相對克隆形成率，規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)血清的絕對克隆形成率應(yīng)不低于20%，胎牛血清的相對克隆形成率應(yīng)不低于80%，新生牛血清的相對克隆形成率應(yīng)不低于50%。

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