ELISA酶聯(lián)免疫吸附實驗之競爭法測抗體

　　酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)是將抗原抗體反應(yīng)的特異性和酶的催化作用相結(jié)合而發(fā)展起來的一種免疫標記技術(shù)，既可用于組織、細胞內(nèi)抗原的檢測，又可用于體 液中抗原抗體的檢測。根據(jù)檢測方法的不同，可將酶聯(lián)法分為雙抗體夾心法、間接法、競爭法、捕獲法和其他ELISA，今天就讓恒遠來為您講解ELISA酶聯(lián)免疫吸附實驗之競爭法。

　　競爭法

　　既可用于抗原半抗原的定量測定，也可用于測定抗體。以抗原競爭法為例，將已知抗體吸附于固相載體，加一定量已知酶標抗原及待測抗原，使兩者 競爭與固相抗體結(jié)合，經(jīng)洗滌，zui后結(jié)合于固相抗體上的酶標抗原與待測抗原含量呈負相關(guān)。步驟如下：

　　(1)已知抗體包被酶標板，4℃隔夜。

　　(2)測定管內(nèi)加一定量酶標抗原和待檢樣品，對照管內(nèi)只加相同量酶標抗原。溫育，洗滌。

　　(3)分別于測定管、對照管內(nèi)加一定量底物顯色。

　　(4)用酶標儀測定對照管、測定管內(nèi)OD值，用空白調(diào)零。通過對照管與測定管OD值之 差，計算標本中待測抗原含量。

　　進行ELISA操作時應(yīng)注意以下幾點：

　?、賹嶒炇覝囟葢?yīng)控制在18℃～25℃;

　?、诩訕禹殰蚀_，同一樣本設(shè)立對照管、測定管各兩孔，取其平均值;

　?、蹏栏窨刂茰?育反應(yīng)溫度及時間，洗滌應(yīng)充分;

　?、?結(jié)果判定應(yīng)以儀器為準，肉眼僅作參考。

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