古朵闡述：WB實驗中蛋白樣品的定量方法如何選擇?
 

　　WB實驗技術交流第一期內我們通過裂解細胞，組織等步驟已經把蛋白提取出來，但提出來后要怎么知道提出的效果怎么樣，怎么才能在同等量上上樣。這就需要進行蛋白定量，目前用得最多的定量方法有兩種，一種是BCA法，一種是Bradford法。今天古朵生物小編下面我們詳細介紹下這兩種定量方法的原理與優(yōu)缺點：

　　BCA法：

　　BCA蛋白定量法是目前廣泛使用的蛋白定量方法之一。其原理是在堿性環(huán)境下 蛋白質分子中的膚鏈結構能與Cu2+絡合生成絡合物，同時將 Cu2+還原成Cu+。BCA 試劑可敏感特異地與Cu+結合，形成穩(wěn)定的有顏色的復合物。在562nm處有高的光單吸收值，顏色的深淺與蛋白質濃度成正比。使用本試劑盒檢測靈敏度高，對不同種類蛋白質檢測變異系數小，操作簡單。

　　Bradford法:

　　Bradford法是簡單和快速的比色蛋白定量方法。這一方法基于考馬斯亮藍G-250與蛋白質結合后，產生藍色化合物反應迅速而穩(wěn)定。反應化合物在 465-595 nm 處有最大的光吸收值，化合物顏色的深淺與蛋白濃度的高低成正比關系，因此可檢測595nm 的光吸收值的大小計算蛋白的含量。

　　BCA法：

　　優(yōu)點:

　　1準確:變異系數遠小于考馬斯亮藍染色法(bradford 法)

　　2.線性范圍寬，檢測靈敏，檢測范圍:20-2000 g/ml

　　3.與金屬離子、還原劑和合劑、去污劑兼容性好

　　4.質量檢測標準曲線線性關系R2值一般為0998

　　缺點:

　　與 Bradford 法相比不能迅速檢測，需要37C孵育30 min。

　　Bradford法:

　　優(yōu)點:

　　1、與BCA法相比，使用本產品反應迅速，即加即檢

　　2、靈敏度范圍為100-1500 g/ml

　　3、質量檢測標準曲線線性關系R2 值一般0980

　　缺點:

　　Bradford 法相比不能迅速檢測，需要37°C孵育30 min.J

　　Bradford法:

　　優(yōu)點:

　　1與BCA法相比，使用本產品反應迅速，即加即檢

　　2靈敏度范圍為100-1500 g/ml

　　3質量檢測標準曲線線性關系R2值一般0980

　　缺點:

　　1.與金屬離子、還原劑和合劑、去污劑兼容性差

　　2.精確度沒有BCA法高

　　ELISA實驗 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術相關產品，勵志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產品遠銷多個國家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準則、以市場需求為導向，不斷開發(fā)高質量的新產品，提供客戶滿意的綜合服務質量"的方針。