古朵闡述：ELISA試劑盒溫育保溫方法及原理
 

　　溫育常選用的溫度有43℃、37℃、室溫文4℃(冰箱溫度)等。37℃是實(shí)驗(yàn)室中常用的保溫溫度，也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的適宜溫度。在建立ELISA辦法作反應(yīng)動力學(xué)研討時(shí)，實(shí)驗(yàn)標(biāo)明，兩次抗原抗體反應(yīng)一般在37℃經(jīng)1-2小時(shí)，產(chǎn)品的生成可達(dá)高峰。

　　為加快反應(yīng)，可進(jìn)步反應(yīng)的溫度，有些實(shí)驗(yàn)在43℃進(jìn)行，但不宜選用更高的溫度?？乖贵w反應(yīng)4℃更為，在放射免疫測定中多使反應(yīng)在冰箱中過夜，以構(gòu)成最多的堆積。但因所需時(shí)刻太長，在ELISA中一般不予選用。

　　溫育保溫的考究：

　　保溫的辦法除有的ELISA儀器附有特制的電熱塊外，一般均選用水浴，可將ELISA板置于水浴箱中，ELISA板底應(yīng)貼著水面，使溫度敏捷平衡。為避免蒸發(fā)，板上應(yīng)加蓋，也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔，此時(shí)可讓反應(yīng)板漂浮在水面上。若用保溫箱，ELISA板應(yīng)放在濕盒內(nèi)，濕盒要選用傳熱性杰出的資料如金屬等，在盒底墊濕的紗布，最終將ELISA板放在濕紗布上。

　　濕盒應(yīng)先放在保溫箱中預(yù)溫至規(guī)矩的溫度，特別是在氣溫較低的時(shí)分更應(yīng)如此。無論是水浴仍是濕盒溫育，反應(yīng)板均不宜疊放，以確保各板的溫度都能敏捷平衡。室溫溫育的反應(yīng)，操作時(shí)的室溫應(yīng)嚴(yán)峻束縛在規(guī)矩的范圍內(nèi)，標(biāo)準(zhǔn)室溫溫度是指20-25℃，但具體操作時(shí)可根據(jù)說明書的要求操控溫育。室溫溫育時(shí)，ELISA板只需平置于操作臺上即可。

　　ELISA試劑盒的原理：

　　ELISA試劑盒為捕獲抗體具有高親和力、高特異性、低內(nèi)毒素的單抗，研究者以刺激劑激活細(xì)胞時(shí)，不會影響活化細(xì)胞分泌細(xì)胞因子。ELISA試劑盒的原理是什么?

　　到目前為止，ELISA法仍在研究當(dāng)中占有著主流地位，普遍應(yīng)用使得實(shí)驗(yàn)更加方便、經(jīng)濟(jì)和準(zhǔn)確， ELISPOT技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)也決定了它的發(fā)展?jié)摿?。LISPOT法來源于ELISA，相比較傳統(tǒng)的ELISA法有所突破，是定量ELISA技術(shù)的延伸和發(fā)展。由于游離的循環(huán)抗體或CK的半哀期不同，使之在體液中不斷的被代謝或與靶器官結(jié)合，傳統(tǒng)的酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA法)不能確切的反映體內(nèi)的抗體及CK的水平。80年代，國外的科研工作者根據(jù)ELISA技術(shù)的基本原理，建立了體外檢測特異性抗體分泌細(xì)胞和CK分泌細(xì)胞的固相酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)技術(shù)(ELISPOT)。 人類原態(tài)胚胎干細(xì)胞無需轉(zhuǎn)基因就能逃避分化，通過OCT4，KLF4，KLF2三種因子的表達(dá)可以維持其天然狀態(tài)。研究人員利用兔ELISA試劑盒兩種生成非轉(zhuǎn)基因原態(tài)人類胚胎干細(xì)胞(hESCs)的方法路徑。他們在加入初始培養(yǎng)基之前，首先令后致敏狀態(tài)的人類胚胎干細(xì)胞接觸組蛋白去乙酰酶抑制劑，這樣初始培養(yǎng)條件下的八細(xì)胞胚胎就能直接建立一種新細(xì)胞系。

　　ELISA試劑盒的原理包括了可以提了兩款改良型siRNA用于活體轉(zhuǎn)染?？梢栽黾觭iRNA-轉(zhuǎn)運(yùn)試劑復(fù)合體的穩(wěn)定性。而SIRNAPLUS則不需要轉(zhuǎn)運(yùn)試劑，其轉(zhuǎn)運(yùn)載體就整合在siRNA分子上。為了解決這一問題，公司開發(fā)了一個試劑盒，可以將shRNA插入到基因組的特定位置。這一靶向整合試劑盒采用鋅指核酸酶技術(shù)，將 shRNAELISA試劑盒插入到人類基因組的AAVS1位點(diǎn)。這一技術(shù)將shRNA定位在一個地方，使影響shRNA表達(dá)水平的一個重要變量固定下來。

　　ELISA試劑盒普遍用作非放射性同位素的成鍵化驗(yàn)。在這種方法中，通常標(biāo)準(zhǔn)配體是固定的，通過加入溶液相受體或蛋白質(zhì)來使之成鍵。通過加入與受體特異性反應(yīng)的抗體來定量成鍵的受體，而且一開始抗體的量以加入第二種能顯色的抗體測量。第二種抗體能識別抗體的末端，在其末端的堿性磷酸酯或過氧化物酶等與酶發(fā)生反應(yīng)，從而使溶液顯色。

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