古朵快訊：質(zhì)粒轉(zhuǎn)染試劑的相關知識點

　　轉(zhuǎn)染(transfection)是細胞在一定條件下主動或被動導入外源DNA片段而獲得新的表型的過程。質(zhì)粒轉(zhuǎn)染對于哺乳細胞蛋白的表達至關重要，轉(zhuǎn)染的方法和步驟直接影響著轉(zhuǎn)染的成功與否。

　　質(zhì)粒轉(zhuǎn)染試劑適用于24孔板培養(yǎng)的哺乳動物細胞，所有數(shù)量和體積均是按孔計算。大部分細胞系所使用的DNA(μg)與VigeneFection(μg)的比值為1:3或1:4，轉(zhuǎn)染狀態(tài)良好的細胞可獲得高轉(zhuǎn)染效率、高表達水平和低細胞毒性。轉(zhuǎn)染步驟：

　　1、貼壁細胞：轉(zhuǎn)染前一天每孔0.5-2×105個細胞接種于500μl培養(yǎng)基中，在轉(zhuǎn)染時細胞可長至90-95%融合。

　　懸浮細胞：在配制轉(zhuǎn)染液前每孔4-8×105個細胞接種于500μl培養(yǎng)基中。

　　2、轉(zhuǎn)染液制備，每孔細胞用量如下：

　　A. 用50μlDMEM培養(yǎng)基(或者其他無血清培養(yǎng)基)稀釋質(zhì)粒DNA，輕輕混勻。

　　B. 取適量VigeneFection 在50μl DMEM培養(yǎng)基中稀釋，室溫孵育5min。

　　C. 將前兩步所稀釋的DNA和VigeneFection 混合，輕輕混勻，室溫放置30min。

　　3、在每孔細胞中加入混合后的轉(zhuǎn)染液，輕輕搖勻。

　　4、貼壁細胞可在轉(zhuǎn)染4-6h后可更換培養(yǎng)基，懸浮細胞可在轉(zhuǎn)染后的18-48h之間，對細胞進行換液。轉(zhuǎn)染18-48h之后可檢測基因表達。如果檢測到蛋白表達，請在轉(zhuǎn)染后24-72h收集培養(yǎng)液。

　　5、對于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，在轉(zhuǎn)染24h后以1:10傳代培養(yǎng)，第二天可加入選擇培養(yǎng)基。

　　質(zhì)粒轉(zhuǎn)染試劑將外源核酸片段導入細胞，影響內(nèi)源基因表達水平。在轉(zhuǎn)染實驗前應根據(jù)實驗要求和細胞特性選擇適合的轉(zhuǎn)染試劑，例如在綿羊成纖維細胞轉(zhuǎn)染過程中FuGene HD的轉(zhuǎn)染效率更高，GenEscortTM I對小鼠膠質(zhì)細胞則具有更好的轉(zhuǎn)染效果?？傊梢宰裱投镜仍瓌t進行選擇。在一定范圍內(nèi)，轉(zhuǎn)染效率與質(zhì)粒/轉(zhuǎn)染試劑比值成正相關，但毒性也會增加?？梢愿鶕?jù)轉(zhuǎn)染試劑推薦比例確定合適的合適的轉(zhuǎn)染比例。

　　上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術相關產(chǎn)品，勵志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠銷多個國家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經(jīng)營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準則、以市場需求為導向，不斷開發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務質(zhì)量"的方針。