古朵技術(shù)大全—ELISA試劑盒常見(jiàn)問(wèn)題整理

　　1、1個(gè)96T試劑盒能測(cè)多少個(gè)樣?

　　2、標(biāo)準(zhǔn)品500ml(96T/48T)，能夠測(cè)多少次?

　　1)單標(biāo)可以測(cè)四次

　　2)雙標(biāo)可以測(cè)兩次

　　3、血液樣本如何選擇測(cè)ELISA?

　　1、血漿全血標(biāo)本經(jīng)抗凝分離后去除血細(xì)胞成分即為血漿，主要化學(xué)成分測(cè)定和凝血項(xiàng)目檢測(cè)等。

　　2、血清是血液離休凝固后分離出來(lái)的液體，血清與血漿相比較，主要是缺乏纖維蛋白原，某些n血因子也發(fā)生了變化。血清主要用于化學(xué)和免疫學(xué)等檢測(cè)。

　　說(shuō)明書(shū)上一般寫(xiě)血漿和血清都可以檢測(cè)，根據(jù)需要選擇，例如：纖維蛋白原檢測(cè)用血漿樣本，血清樣本檢測(cè)纖維蛋白原殘留。

　　4、血液樣本發(fā)生溶血是否能檢測(cè)?

　　輕微溶血勉強(qiáng)可以檢測(cè)，明顯溶血建議重新取樣，溶血因紅細(xì)胞破壞溶解時(shí)釋放大量具有過(guò)氧化物酶活性的血紅蛋白，在以辣根過(guò)氧化物酶為標(biāo)記的ELISA，會(huì)導(dǎo)致非特異性顯色，干擾測(cè)定結(jié)果。

　　5、組織樣本操作流程：

　　1) 組織樣本必須保持鮮重，如果是凍存的組織，應(yīng)該室溫平行2小時(shí)以上，然后用生理鹽水沖洗干凈，再用濾紙把周?chē)乃治桑Q(chēng)重!組織重量不能低于50mg;

　　2)組織勻漿液選取是PBS(PH=7.2-7.4，濃度為0.01mol/L)勻漿的比例為1:10，相當(dāng)于1g組織加9ml的勻漿液;

　　3)組織勻漿后，離心取上清，離心轉(zhuǎn)數(shù)為5000轉(zhuǎn)，但不能超過(guò)5000轉(zhuǎn)，時(shí)間為15分鐘;

　　4) 實(shí)驗(yàn)中樣本提取的是200mg的樣本加1.8ml的勻漿液。

　　6、組織樣本操作中的常見(jiàn)問(wèn)題：

　　1)問(wèn)：從各樣品中取了同樣大小的肉塊吧?具體是取了多少?怎么取的?稱(chēng)重方式嗎?之前好像提到過(guò)肉塊大小的尺寸，是不是用其他方式做到了各樣品的起始量的一致?

　　答：對(duì)于組織，不可能確定好每塊組織都達(dá)到恒定的重量，這個(gè)不太現(xiàn)實(shí)。都是按照固定的勻漿比例(勻漿比例為10%)，相當(dāng)于1g組織加9ml的勻漿液，重量小的，勻漿液也會(huì)少。最終的濃度是不變的!

　　2)問(wèn)：測(cè)定樣品時(shí)需要將樣品制成液體樣本吧?請(qǐng)問(wèn)是如何做成液體樣品的?勻漿嗎?如果是勻漿方式的話應(yīng)該有溶劑的，使用了哪些溶劑呢?

　　答：勻漿比例在上面已經(jīng)告訴了，勻漿液采用的是0.01mol的PBS(磷酸鹽緩沖液)PH控制在7.2-7.4。

　　7、ELISA試劑盒操作細(xì)節(jié)常見(jiàn)問(wèn)題整理：

　　1)問(wèn)：是不是空白對(duì)照就是什么都不加?

　　答：不加樣本，不加樣本稀釋液，不加酶標(biāo)試劑，其他都可以加。

　　2)問(wèn)：樣本稀釋液是配好的嗎?

　　答：樣本稀釋液是配好的。

　　3)問(wèn)：樣本稀釋液可以用來(lái)直接稀釋血清嗎?

　　答：可以的，直接加40ul就可以了。

　　4)問(wèn)：洗滌液是濃縮的;是一次配好，還是現(xiàn)配現(xiàn)用?謝謝。

　　答：濃縮的，現(xiàn)配現(xiàn)用。

　　5)問(wèn)：加入的顯色液A\B分別是什么物質(zhì)?作用原理?

　　答：顯色劑A和B，是經(jīng)典的TMB顯色系統(tǒng)。具體原理可以參考免疫方面的教科書(shū)。在這里不詳細(xì)列出。

　　6)問(wèn)：終止液是什么物質(zhì)?如何做到終止反應(yīng)的?

　　答：終止液是2mol的硫酸溶劑。終止反應(yīng)也是和原理相關(guān)。這個(gè)參考教科書(shū)!

　　7)問(wèn)：稀釋液是什么成分?

　　答：標(biāo)準(zhǔn)稀釋液是PBS(PH=7.2-7.4，濃度是0.01mol/L)。樣本稀釋液是含有0.5%BSA的PBS(PH=7.2-7.4，濃度是0.01mol/L)。

　　8)問(wèn)：需要避光保存的試劑是哪個(gè)?

　　答：需要避光的是顯色液B。

　　9)問(wèn)：試劑盒從冰箱取出后，室溫放置會(huì)影響其效果嗎?

　　答：試劑盒在做實(shí)驗(yàn)前應(yīng)該要室溫平衡一小時(shí)。短時(shí)間(3、4小時(shí))沒(méi)有任何影響。

　　10)問(wèn)：樣品研磨后是立即離心，還是在4度冰箱里提取幾個(gè)小時(shí)以后再離心?

　　答：樣本研磨后立即離心即可。

　　補(bǔ)充：5%BSA 封閉液(Blocking Buffer)適用于 Western Blotting、ELISA 以及免疫組化實(shí)驗(yàn)中非特異性蛋白結(jié)合位點(diǎn)的封閉。

　　8、樣本保存條件和時(shí)間怎么選擇?

　　9、最后如果樣本數(shù)據(jù)沒(méi)有達(dá)到預(yù)期效果，不要慌，可以按下面流程排查問(wèn)題，或者聯(lián)系公司技術(shù)。

　　ELISA檢測(cè)試劑盒 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專(zhuān)門(mén)從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品，勵(lì)志研發(fā)和銷(xiāo)售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠(yuǎn)銷(xiāo)多個(gè)國(guó)家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿(mǎn)足客戶(hù)的需求"的經(jīng)營(yíng)宗旨;牢固樹(shù)立“以客戶(hù)需求為準(zhǔn)則、以市場(chǎng)需求為導(dǎo)向，不斷開(kāi)發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶(hù)滿(mǎn)意的綜合服務(wù)質(zhì)量"的方針。