elisa試劑盒和生化試劑盒該如何選擇和評(píng)判發(fā)布時(shí)間：2018-07-26 點(diǎn)擊次數(shù)：5023次 隨著電子檢驗(yàn)儀器的研制和普遍使用，推動(dòng)了科研診斷試劑研究和使用廣泛化的進(jìn)程，商品試劑與標(biāo)準(zhǔn)液按檢測項(xiàng)目組合成一套放在一個(gè)包裝盒內(nèi)叫試劑盒(reagent kit)，或叫試劑組合(reagent set)。

　　與自動(dòng)化分析儀或者酶標(biāo)儀匹配的試劑盒的研制、生物試劑和供應(yīng)走向產(chǎn)業(yè)化的道路，它無疑是科研檢驗(yàn)發(fā)展*一個(gè)巨大的技術(shù)進(jìn)步。但是，試劑盒的質(zhì)量，將嚴(yán)重影響測定結(jié)果的正確性。為了增強(qiáng)識(shí)別試劑質(zhì)量的能力，提高拒用劣質(zhì)試劑的自覺性，掌握有關(guān)試劑盒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和質(zhì)量評(píng)價(jià)是十分有益的。

　　我們先來說說和自動(dòng)生化分析儀想匹配的生化分析試劑盒的相關(guān)情況。此類試劑種類繁多，有液體型、粉劑型、片劑型，有單一試劑、雙試劑、干試劑、多試劑等。

　　一、液體型試劑和粉(片)劑型試劑

　　(一)液體型試劑

　　無論是單試劑還是雙試劑型試劑，目前乃至今后仍以液體型為主要?jiǎng)┬汀Ｆ鋬?yōu)點(diǎn)是液體型試劑的試劑組分高度均一，瓶間差異小，測定重復(fù)性好和使用方便;它也無需加入任何輔助試劑及蒸餾水，避免了外源性水質(zhì)對試劑的影響，性能較穩(wěn)定，測定結(jié)果較為準(zhǔn)確。缺點(diǎn)是液體型試劑(尤其是酶試劑)保存時(shí)間較短，不便于運(yùn)輸。

　　1.液體單試劑

　　所謂液體單試劑就是將某種生化檢驗(yàn)項(xiàng)目所用到的試劑科學(xué)地混合在一起，組成為一種試劑。應(yīng)用時(shí)，只須將標(biāo)本和試劑按一定比例混合，即可進(jìn)行相應(yīng)的生化反應(yīng)，然后用適當(dāng)?shù)姆椒z測結(jié)果。應(yīng)用十分方便。為了簡化測定操作程序，提高工作效率，一度大多數(shù)試劑廠家都生物試劑單試劑，以滿足用戶的需要。如測定葡萄糖和的酶法試劑等。這些試劑的廣泛使用，充分顯示出酶法試劑無毒性、操作簡便快速、測定結(jié)果可靠等優(yōu)點(diǎn)。但對有些生化檢驗(yàn)項(xiàng)目來說，單試劑存在抗干擾能力差的缺點(diǎn)，給測定結(jié)果帶來相當(dāng)大的分析誤差。例如，甘油三酯測定的一步法試劑，由于未消除樣品中的游離甘油，使測定結(jié)果中包括了內(nèi)源性甘油(平均約為 0.11mmol/L)，會(huì)給甘油三酯的測定值帶來較大的誤差。類似的情況還見于和尿酸及對Trinder+選用時(shí)值得注意。

　　2.液體雙試劑 所謂液體雙試劑就是將某些生化檢測項(xiàng)目所用到的試劑，按用途科學(xué)地分成兩類，分別配成兩種試劑，通常試劑加入后可起到全部或部分消除某些內(nèi)源性干擾的作用，第二試劑為啟動(dòng)被檢測物質(zhì)反應(yīng)的試劑，兩種試劑混合后才共同完成被檢項(xiàng)目的生化反應(yīng)。然后用適當(dāng)?shù)姆椒z測結(jié)果。雙試劑型試劑盒，它保持了單試劑的優(yōu)點(diǎn)，增強(qiáng)了抗干擾能力和試劑的穩(wěn)定性，提高了測定的準(zhǔn)確性，代表了診斷試劑盒劑型研制的主要發(fā)展方向。

　　(二)粉(片)劑型試劑

　　所謂粉劑型及片劑型試劑，即是將試劑的各組分用球磨技術(shù)粉碎成粉劑或混合后壓成片劑，使用前再加入的溶液復(fù)溶成液體試劑。干粉試劑如果在凍干分裝前是液體型的，則其各組分是相當(dāng)均勻的;但如果用固體原料研磨后制成粉劑或片劑，則存在許多問題：①要使試劑各組分混合得非常均勻，技術(shù)難度很大;②分裝過程中的稱量誤差及復(fù)溶時(shí)加水量的準(zhǔn)確性影響試劑的瓶間差;

　?、鬯|(zhì)優(yōu)劣對試劑的穩(wěn)定性和測定的可靠性有相當(dāng)大的影響。

　　二、其它類型試劑

　　為了適應(yīng)生化分析儀和測定方法學(xué)的進(jìn)步，近年來研究了許多新型的試劑盒，主要有以下幾種。

　　(一)快速反應(yīng)試劑盒

　　快速反應(yīng)試劑盒主要是為了適應(yīng)生化分析的技術(shù)進(jìn)步，縮短反應(yīng)時(shí)間，提高工作效率。如血液葡萄糖快速測定試劑盒。其試劑成分及濃度為磷酸鹽緩沖液 100mmol/ L，pH7.4±0.1，葡萄糖氧化酶 > 40u / ml，變旋酶 > 0.2u / ml，過氧化物酶 > 2.5u / ml，4-氨基 0.5 mmol/ L，4-羥基苯甲酸 4 mmol/L，亞鐵qing化鉀 1mg / L，疊氮鈉 0.4g / L。同一般葡萄糖氧化酶法試劑相比是明顯增加了葡萄糖氧化酶及過氧化物酶用量，更主要是增加了變旋酶，可使反應(yīng)加快，3～4分鐘后即生成終顏色。再如快速試劑盒，用的是 pH6.6±0.2，250mmol/ L 磷酸鹽緩沖液，酯酶為 250u / L，氧化酶 250 u/L，過氧化物酶 4000u / L，4-氨基 0.3mg /L，DHBS 8mmol/ L。樣品與試劑比例是 1:100。37℃反應(yīng) 2 分鐘即可完成反應(yīng)。可以明顯看出是加酯酶和氧化酶等效應(yīng)酶用量，從而使反應(yīng)加速。目前要求這種快速反應(yīng)的試劑用戶還不多，但它是一種發(fā)展趨勢。

　　(二)一步法試劑盒

　　這是隨著方法學(xué)的改進(jìn)，特別是免疫技術(shù)的進(jìn)步，利用特異性抗體參與反應(yīng)的新型試劑。如高密度脂蛋白(HDL)測定。以往多采用超速離心法和沉淀法使 HDL 從其他脂蛋白中分離后再測定 HDL中，沉淀法操作繁瑣，必須預(yù)先處理才能用生化分析儀分析。近年來采用抗低密度脂蛋白和極低密度脂蛋白血清預(yù)先抑制 LDL 及 VLDL，然后再測定 HDL，這樣就減少沉淀預(yù)處理，直接測定出高密度。類似的試劑盒還有肌酸激酶(CK)及其同工酶 CK-MB 的測定。

　　(三)多項(xiàng)同測組合試劑盒

　　這類型試劑主要是用于三點(diǎn)雙項(xiàng)同測終點(diǎn)法、三點(diǎn)雙項(xiàng)同測連續(xù)監(jiān)測法和三點(diǎn)雙項(xiàng)同測終點(diǎn)速率法測定的試劑盒。很明顯這類試劑同以往單試劑和雙試劑有明顯不同。隨著雙試劑的應(yīng)用，研究生化分析儀的分析方法也相應(yīng)發(fā)展，其中有一種分析方法是在同一比色杯中，先后加入兩種試劑與檢品中的兩種被檢物發(fā)生反應(yīng)，在各反應(yīng)達(dá)到平衡期時(shí)分別測定，整個(gè)測定過程進(jìn)行三次比色，測定兩個(gè)項(xiàng)目，稱為三點(diǎn)雙項(xiàng)同測終點(diǎn)法。例如甘油三脂、同時(shí)測定法。該法的試劑為Tris 緩沖液、ATP、MgCl2、過氧化物酶、磷酸甘油氧化酶、甘油激酶、脂肪酶、4-氨基安替吡啉、2-羥 3.5-氯苯磺酸鈉、Triton-X 等，第二試劑為 Tris 緩沖液，其中含氧化酶。當(dāng)血清或標(biāo)準(zhǔn)液(包括甘油三酯和)與試劑混合后立即進(jìn)行次比色(510nm)得空白吸光度。37℃作用 5 分鐘后進(jìn)行第二次比色，為甘油三酯與酶試劑反應(yīng)終點(diǎn)的吸光度，又是測定的空白吸光度。然后加入第二試劑，37℃作用 5～10 分鐘，進(jìn)行第三次比色，為與酶試劑反應(yīng)終點(diǎn)的吸光度。

　　甘油三酯濃度=[A2(樣品)-AB(樣品)]/[A2(TG 標(biāo)準(zhǔn))-AB(TG 標(biāo)準(zhǔn))]×甘油三酯標(biāo)準(zhǔn)的濃度總濃度=[A3(樣品)-A2(樣品)]/[A3(TC 標(biāo)準(zhǔn))-A2(TC 標(biāo)準(zhǔn))]×標(biāo)準(zhǔn)的濃度

　　(四)卡式試劑盒

　　試劑首先裝入試劑瓶，瓶上充分使用編碼技術(shù)，而后根據(jù)編碼啟動(dòng)調(diào)配、使用及更換儲(chǔ)存。其特點(diǎn)是：①卡式試劑瓶上條碼令使用者可快捷準(zhǔn)確地輸入試劑數(shù)據(jù)，如測試數(shù)量、批號(hào)、有效期，保證正確識(shí)別試劑。②試劑裝載后能自動(dòng)調(diào)配，可消除潛在誤差，并節(jié)省操作時(shí)間。③持續(xù)不斷地監(jiān)察儀器上已裝載的試劑存量，并在供應(yīng)量不足時(shí)通知使用者。試劑裝載使用時(shí)間可長達(dá)一個(gè)月。④所有卡式試劑盒大小劃一，有利儲(chǔ)存。卡式試劑設(shè)計(jì)較*，可防止試劑蒸發(fā)及降解，能確保試劑裝載后的穩(wěn)定性更長，從而節(jié)省成本。⑤標(biāo)簽根據(jù)測試類別以顏色編碼，便于使用者識(shí)別。

　　(五)濃縮試劑盒

　　上述卡式試劑盒就是采用的濃縮試劑，使用時(shí)自動(dòng)完成稀釋，而后用于測定。濃縮試劑便于工作、儲(chǔ)存、運(yùn)輸、裝載等*性是很明顯的，濃縮試劑便于監(jiān)控、減少校正次數(shù)、提高工作質(zhì)量。在濃縮試劑基礎(chǔ)上又組成雙試劑及多項(xiàng)同測組合試劑，又體現(xiàn)出它們所具有的特點(diǎn)及*性。

　　三、液體雙試劑盒的特點(diǎn)

　　液體雙試劑與其它類型試劑比較具有液體試劑和雙試劑的優(yōu)點(diǎn)。

　　(一)提高了抗干擾反應(yīng)的能力

　　在研究生化測定過程中，血標(biāo)本除了含有待測物質(zhì)外，還含有各種酶、有機(jī)物、無機(jī)鹽等物質(zhì)，這些物質(zhì)都會(huì)干擾或參與測試反應(yīng)，引起非特異性反應(yīng)干擾，而雙試劑型試劑盒設(shè)計(jì)的一個(gè)主要目的就是為了克服這種干擾反應(yīng)。在測定過程中，首先讓試劑Ⅰ與標(biāo)本中的干擾物質(zhì)反應(yīng)，反應(yīng) 5分鐘后，再用試劑Ⅱ啟動(dòng)真正的測試反應(yīng)，從而使測定結(jié)果更加準(zhǔn)確。例如：尿素氮的酶法測定。此測定通過二步化學(xué)反應(yīng)來完成。

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