考馬斯亮藍(lán)法測蛋白含量的正確使用方法

　　樣品可溶性蛋白質(zhì)含量常常用于酶活性計(jì)算。此外，可溶性蛋白質(zhì)含量也用于食品等質(zhì)量分析。

　　在酸性溶液中，考馬斯亮藍(lán)G-250與蛋白質(zhì)結(jié)合形成藍(lán)色復(fù)合物;該復(fù)合物在595nm處有最大吸收峰， 其顏色的深淺與蛋白質(zhì)的濃度成正比。該方法靈敏度高，適合微量蛋白質(zhì)分析。

　　使用所需設(shè)備：

　　考馬斯亮藍(lán)法測蛋白 產(chǎn)品組成：

　　試劑一：液體×1瓶，4℃保存。

　　標(biāo)準(zhǔn)品：液體×1瓶，4℃保存。

　　樣品中可溶性蛋白質(zhì)提取：

　　液體樣品：澄清無色液體樣品可以直接測定。

　　組織樣品：準(zhǔn)確稱取約0.1 g樣品，加1mL提取液(自備，根據(jù)需要選用酶提取緩沖液或者蒸餾水或者生理鹽水)，冰浴勻漿，10000rpm，4℃離心10min，取上清，即待測液。(動物樣品常常需要稀釋)

　　吸光值測定：

　　1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min以上，蒸餾水調(diào)零。

　　2. 空白管：取0.5mL EP管，加入40μL蒸餾水，250μL試劑一，混勻后室溫靜置10min，取200μL于微量玻璃比色皿/96孔板，于595nm比色，10~20min完成比色，記為A空白管。

　　3. 標(biāo)準(zhǔn)管：取0.5mL EP管，加入40μL標(biāo)準(zhǔn)液，250μL試劑一，混勻后室溫靜置10min，取200μL于微量玻璃比色皿/96孔板，于595nm比色，10~20min完成比色，記為A標(biāo)準(zhǔn)管。

　　4. 測定管：取0.5mL EP管，加入40μL待測液，250μL試劑一，混勻后室溫靜置10min，取200μL于微量玻璃比色皿/96孔板，于595nm比色，10~20min完成比色，記為A測定管。

　　蛋白質(zhì)含量計(jì)算公式：

　　C待測(µg/m L)= C標(biāo)準(zhǔn)管×(A測定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)

　　=50×(A測定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)

　　C標(biāo)準(zhǔn)管：標(biāo)準(zhǔn)品蛋白質(zhì)濃度，50μg/mL。

　　注意事項(xiàng)：

　　1.加考馬斯亮藍(lán)后，在10~20min內(nèi)吸光值相對較穩(wěn)定，因此須在10~20min完成比色。

　　2.不宜用石英比色皿，可用玻璃或塑料比色皿，測完成后立即用95%乙醇沖洗。

　　3.測定前用1~2個樣做預(yù)實(shí)驗(yàn)，確保蛋白濃度在0~100µg/ml范圍內(nèi)，否則需要做相應(yīng)稀釋。

　　考馬斯亮藍(lán)法測蛋白 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品，勵志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠(yuǎn)銷多個國家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經(jīng)營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準(zhǔn)則、以市場需求為導(dǎo)向，不斷開發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務(wù)質(zhì)量"的方針。