核酸染料使用方法和注意事項

　　使用方法：

　　1.膠染法(用法同EB) (1)制膠時加入GelRed核酸染料(例如：每50mL瓊脂糖溶液中加入5μL GelRed 10,000×儲液，以此比例類推)。 (2)按照常規(guī)方法進(jìn)行電泳。 注意事項： 此方法染色染料用量相對較少，500 μL染料大約可以做100塊50 mL的膠。 由于GelRed具有良好的熱穩(wěn)定性，可以在熱的瓊脂糖溶液中直接添加，而不需要等待溶液冷卻。搖晃，振蕩或者翻轉(zhuǎn)以保證染料充分混勻。也可以選擇將GelRed儲液加到瓊脂糖粉末和電泳緩沖液中，然后用微波爐或其他常用方式加熱以制備瓊脂糖凝膠。GelRed兼容所有常用的電泳緩沖溶液。 含有染料的預(yù)制凝膠溶液可以大量制備，并長期保存直到使用。 此方法不適合預(yù)制聚丙烯xian胺凝膠，對于聚丙烯xian胺凝膠請使用泡染法。

　　2.泡染法 (1)按照常規(guī)方法進(jìn)行電泳。 (2)用H2O將GelRed 10,000×儲液稀釋約3,300倍到0.1 M NaCl中，制成3×染色液。(例如將15μL GelRed 10,000×儲液和5 mL 1 M NaCl加到45 mL H2O中)。 (3)將凝膠小心地放入合適的容器中，如聚丙烯容器中，緩慢加入足量的3×染色液浸沒凝膠，室溫振蕩染色30 min左右，最佳染色時間根據(jù)凝膠厚度以及瓊脂糖濃度不同而略有不同。對于含3.5～10%丙烯xian胺的凝膠，染色時間通常介于30 min到1 h，并隨丙烯xian胺含量增加而延長。

　　注意事項：

　　1)用泡染法染色時，染料用量較多，單次使用的染色液可重復(fù)使用3次左右。3×GelRed染色液可以大量制備，在室溫下避光保存直至用完。

　　2)如果總是看到條帶彌散或分離不理想，建議使用泡染法染色以確認(rèn)問題是否與染料有關(guān)。

　　3)如果染色后問題依舊存在，則說明問題與染料無關(guān)，請嘗試：降低瓊脂糖濃度、延長凝膠時間以保證邊緣清晰、改進(jìn)上樣技巧或選擇泡染法染色。

　　3.預(yù)染法(最省染料的染色方法，按25μL體積上樣，500μL原液理論做20萬個樣品)

　　1)該方法適用于瓊脂糖凝膠電泳和PAGE凝膠電泳

　　2)工作液的配制：用電泳緩沖液將10000×的GelRed原液稀釋1000倍，即為10 X GelRed工作液。GelRed工作液可以置2-8℃冷藏一個月以上。

　　3)制膠：按常規(guī)方法制膠，不含任何染料。

　　4)樣品染色：向分析樣品中加入GelRed工作液和載樣緩沖液，室溫放置10分鐘，使GelRed與樣品中DNA充分結(jié)合。GelRed工作液加入量為總上樣量的1/10，使GelRed在上樣時的終濃度為1X.

　　5)DNA Marker染色：將5μL DNA Marker和1μLGelRed工作液混勻，室溫放置5分鐘，使GelRed與DNA充分結(jié)合。

　　6)上樣、電泳：按常規(guī)操作。 注意事項： 根據(jù)染料分子量小，帶電荷少的特性開發(fā)本染色方法，按照一塊膠10個樣品計算，500μL原液理論上可以完成2萬塊膠的染色。

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