細(xì)胞分選在多種研究領(lǐng)域都有涉及，例如腫瘤學(xué)，神經(jīng)生物學(xué)，免疫學(xué)等。但是大家對它們的優(yōu)缺點(diǎn)可能不太清楚，那今天古朵生物在這里跟大家聊一下流式分選的原理、應(yīng)用及與磁珠分選的區(qū)別。

流式細(xì)胞儀分選原理

當(dāng)經(jīng)熒光染色或標(biāo)記的單細(xì)胞懸液放入樣品管中，被高壓壓入流動室內(nèi)。流動室內(nèi)充滿鞘液，在鞘液的包裹和推動下，細(xì)胞被排成單列，以一定速度從流動室噴口噴出。在流動室的噴口上配有一個(gè)超高頻的壓電晶體，充電后振動，使噴出的液流斷裂為均勻的液滴，待測細(xì)胞就分散在這些液滴之中。將這些液滴充以正、負(fù)不同的電荷，當(dāng)液滴流經(jīng)過帶有幾千伏的偏轉(zhuǎn)板時(shí)，在高壓電場的作用下偏轉(zhuǎn)，落入各自的收集容器中，沒有充電的液滴落入中間的廢液容器，從而實(shí)現(xiàn)細(xì)胞的分離。

1.先制備單細(xì)胞懸液（可檢測多種樣本的單細(xì)胞懸液：外周血、骨髓、細(xì)胞穿刺液、洗脫液、實(shí)體組織、培養(yǎng)細(xì)胞等，如果是無菌實(shí)驗(yàn)應(yīng)該注意無菌操作）
2.樣本染色：調(diào)節(jié)電壓與選取目的細(xì)胞群（分選前應(yīng)該做一個(gè)預(yù)實(shí)驗(yàn)，優(yōu)化儀器的測定條件，建立分選門）
3.細(xì)胞分選與收集

流式分選的應(yīng)用

1.細(xì)胞增值、活性和凋亡研究
2.疾病細(xì)胞如炎癥細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞等的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸研究
3.基因表達(dá)和表達(dá)調(diào)控研究
4.細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)和生物大分子間相互作用研究
5.各種病原體如病毒、細(xì)菌等基礎(chǔ)和致病性和致病機(jī)理研究
6.藥理藥效和藥物開發(fā)研究
7.移植和細(xì)胞治療研究
8.生物材料對細(xì)胞結(jié)構(gòu)、活性和功能的影響

利用儀器的分選功能分選得到高純度、高活性的稀有細(xì)胞，通過直接培養(yǎng)、誘導(dǎo)、增殖、分化、活化和移植等進(jìn)行更深一步的細(xì)胞功能和細(xì)胞治療探索，還可以在此基礎(chǔ)上逆向進(jìn)行基因組合蛋白質(zhì)組相關(guān)研究，尋找致病基因、致病蛋白和疾病信號傳導(dǎo)方式。

影響流式分選的因素
1.分選速度：振蕩頻率（頻率越高，速度越快）、鞘液壓力、噴嘴大小、上樣速度(速度過快，得率會降低，故應(yīng)該按實(shí)驗(yàn)需求來設(shè)定)
2.分選純度：精確設(shè)定液滴延遲時(shí)間（跑微球去矯正）、保證液流穩(wěn)定、選擇合適的分選模式、排除樣本粘連、合理設(shè)門（用散點(diǎn)圖）、合理閾值設(shè)定
3.分選得率：液滴延遲時(shí)間要準(zhǔn)確、液流穩(wěn)定、如果不考慮純度的情況下（不需后續(xù)培養(yǎng)），可以選擇Enrich/yield分選模式
4.分選活性：細(xì)胞本身的活性、儀器潔凈程度、鞘液壓力、噴嘴大?。▽τ诖嗳跫?xì)胞，盡量采用低壓和大噴嘴，包裹細(xì)胞的液滴越大，對細(xì)胞的沖擊越小）、上樣管路設(shè)計(jì)及管壁光滑程度

免疫磁珠法分離細(xì)胞原理

是基于細(xì)胞表面抗原能與連接有磁珠的特異性單抗相結(jié)合，在外加磁場中，通過抗體與磁珠相連的細(xì)胞被吸附而滯留在磁場中，無該種表面抗原的細(xì)胞由于不能與連接著磁珠的特異性單抗結(jié)合而沒有磁性，不在磁場中停留，從而使細(xì)胞得以分離。

免疫磁珠法分為正選法和負(fù)選法：

正選法：磁珠結(jié)合的細(xì)胞就是所要分離獲得的細(xì)胞
負(fù)選法：磁珠結(jié)合不需要的細(xì)胞，游離于上清液的細(xì)胞為所需細(xì)胞

磁分離細(xì)胞的重要指標(biāo)是：

1.純度和得率，這取決于磁珠所連接單抗的特異性和磁珠大?。ù判裕欢〉拇胖榈寐什桓?，太大的磁珠又會影響細(xì)胞活性，也無法直接上流式。
2.磁珠大小約為200nm為中等大小磁珠
3.小磁珠的優(yōu)點(diǎn)是對細(xì)胞溫和，不影響分離細(xì)胞的后續(xù)培養(yǎng)，可直接上流式檢測，不影響散射光；缺點(diǎn)是需要很強(qiáng)的磁場來分離細(xì)胞，分離速度慢，得率不高，需要一次性的分離柱，不能在普通試管進(jìn)行，成本昂貴。
4.大磁珠的優(yōu)點(diǎn)是技術(shù)簡單，分離可在試管中完成，易于增減細(xì)胞用量，速度快，得率高，成本低；缺點(diǎn)是對細(xì)胞造成機(jī)械壓力，影響其生物學(xué)活性，不利于分離后培養(yǎng)，純度低，阻塞FCM的噴嘴。