一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

    了解和掌握熒光分光光度計(jì)的使用方法

    二、實(shí)驗(yàn)原理

    測(cè)Vc 的實(shí)驗(yàn)原理：抗壞血酸在氧化劑存在下，被氧化成脫氫抗壞血酸，氧化型的抗壞血酸與鄰苯二胺作用生成熒光化合物(脫氫抗壞血酸對(duì)－氮雜萘)，此熒光化合物的激發(fā)波長(zhǎng)是350nm，熒光波長(zhǎng)在430nm，其熒光強(qiáng)度與抗壞血酸含量成正比，樣品的熒光強(qiáng)度與抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)樣品熒光強(qiáng)度相比較，即可計(jì)算出樣品中抗壞血酸的含量。

    測(cè)VB2的實(shí)驗(yàn)原理 :維生素B2（核黃素）在468nm紫外光激發(fā)下產(chǎn)生熒光，在一定范圍內(nèi)，其熒光強(qiáng)度與核黃素濃度成正比。用連二亞硫酸鈉還原成無(wú)熒光物質(zhì)，通過(guò)測(cè)定樣品在加入連二亞硫酸鈉前后兩次的熒光強(qiáng)度差值，計(jì)算樣品中核黃素的含量 。

    三、試劑與器材

    熒光分光光度計(jì)、組織搗碎機(jī)、離心機(jī)、電子天平、燒杯、試紙、磷酸—冰醋酸溶液、抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)溶液、活性炭處理、pH4.6醋酸－醋酸鈉緩沖液、VB2標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液、連二亞硫酸鈉、 0.1mol/L HCl。

    四、操作方法

    ① Vc測(cè)定：稱樣→加偏磷酸-冰醋酸→勻漿→樣品、標(biāo)樣加活性炭→過(guò)濾→處理→加鄰苯二胺→測(cè)定

    ② VB2測(cè)定：稱樣→加鹽酸→勻漿→樣品、標(biāo)樣加醋酸-醋酸鈉緩沖液→過(guò)濾→測(cè)定→加連二亞硫酸鈉→測(cè)定

    五、關(guān)鍵步驟與注意事項(xiàng)

    1、加入的活性炭要適量；

    2、鄰苯二胺鹽酸鹽溶液在空氣中顏色變暗，影響顯色，現(xiàn)用現(xiàn)配；

    3、由于抗壞血酸和核黃素遇光分解，所以整個(gè)操作過(guò)程應(yīng)避光；