HTRF（均相時(shí)間分辨熒光，Homogeneous Time-Resolved Fluorescence ）技術(shù)快速、穩(wěn)定、不需洗滌、操作簡(jiǎn)單、易于自動(dòng)化和微型化，其作為藥物研發(fā)領(lǐng)域的技術(shù)，并廣泛用于信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)研究和免疫檢測(cè)。該技術(shù)已經(jīng)在醫(yī)藥公司、生物技術(shù)公司和學(xué)術(shù)研究機(jī)構(gòu)應(yīng)用了15年以上。

HTRF介紹
HTRF（均相時(shí)間分辨熒光，Homogeneous Time-Resolved Fluorescence ）是用來(lái)檢測(cè)純液相體系中待測(cè)物的一種常用方法。該技術(shù)結(jié)合了熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET，F(xiàn)luorescence Resonance Energy Transfer）和時(shí)間分辨熒光（TRF, Time-Resolved Fluorescence）兩種技術(shù)。HTRF是基于TR-FRET的化學(xué)技術(shù)，擁有與其它TR-FRET技術(shù)相似的特征，HTRF技術(shù)的能量供體（Donor）和能量受體（Acceptor）具有非常長(zhǎng)的半衰期，很大的Stroke's shift等。HTRF數(shù)據(jù)分析方面，有來(lái)自于能量供體和能量受體的兩個(gè)發(fā)射光，可采用Cisbio的比值法來(lái)分析數(shù)據(jù)，從而去除由于溶液通透率、細(xì)胞大小、細(xì)胞數(shù)量等不同引起的誤差。

HTRF技術(shù)的優(yōu)勢(shì)
操作非常簡(jiǎn)單  實(shí)驗(yàn)過(guò)程不需要繁瑣的洗板，只需要混勻孵育后檢測(cè)
體系非常穩(wěn)定 穴狀化合物非常穩(wěn)定，可耐受較寬的pH范圍、二價(jià)金屬離子、螯合物等，并且可以在至少48小時(shí)內(nèi)反復(fù)多次檢測(cè)
數(shù)據(jù)真實(shí)可靠  背景低，受到樣品的干擾非常少，假陽(yáng)性假陰性均低，尤其可去除由于天熱產(chǎn)物自發(fā)熒光等引起的干擾
應(yīng)用靈活多樣  HTRF可以看作是不需洗滌的ELISA，應(yīng)用范圍很寬
易于實(shí)現(xiàn)微型化，通量高

HTRF應(yīng)用解決方案
HTRF技術(shù)從產(chǎn)生以來(lái)，已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于免疫檢測(cè)和細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的研究，在藥物研發(fā)中被應(yīng)用于不同的階段，從實(shí)驗(yàn)方法的建立、高通量篩選（HTS），lead到hit，一直到臨床前研究。HTRF技術(shù)非常靈敏而且穩(wěn)定，可以進(jìn)行細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和生化實(shí)驗(yàn)，并且可以使用384和1536孔板。HTRF的很多應(yīng)用是基于抗體的檢測(cè)，包括GPCR（受體配體結(jié)合，受體二聚化，cAMP 和IP-1 的檢測(cè)，以及磷酸化ERK和AKT的定量）、激酶、細(xì)胞因子和生物標(biāo)志物、生物過(guò)程（治療性抗體和蛋白藥物的生產(chǎn)）等，以及蛋白和蛋白、蛋白和多肽、蛋白和DNA/RNA相互作用的研究。HTRF具有與ELISA同等的檢測(cè)范圍和檢測(cè)極限，但是它不需要洗板，可以極大地減少實(shí)驗(yàn)時(shí)間，所以HTRF技術(shù)可以取代大部分ELISA實(shí)驗(yàn)，為均相ELISA。

G蛋白偶聯(lián)受體的解決方案
HTRF技術(shù)可用來(lái)進(jìn)行第二信使檢測(cè)、胞內(nèi)信號(hào)分子檢測(cè)和受體配體結(jié)合檢測(cè)方案，從而從幫助您進(jìn)行G蛋白偶聯(lián)受體的研究。

HTRF激酶檢測(cè)解決方案
HTRF KinEASETM利用標(biāo)記了鑭系元素Eu3+的特異性磷酸化位點(diǎn)的單抗以及XL665標(biāo)記的鏈霉親和素跟生物素化的底物形成夾心實(shí)驗(yàn)。整個(gè)實(shí)驗(yàn)包含兩步：
酶反應(yīng)步驟:激酶在有或者沒(méi)有化合物的條件下跟特異的底物混合，加入ATP起始反應(yīng)。
檢測(cè)步驟:加入用檢測(cè)緩沖液配置的單抗-Eu3+和XL665，在檢測(cè)緩沖液中含有EDTA，因此能夠終止激酶反應(yīng)。以上兩種檢測(cè)試劑可以先混合以減少加樣步驟。

HTRF細(xì)胞因子檢測(cè)
HTRF細(xì)胞因子檢測(cè)是基于雙抗體夾心法，包括兩個(gè)單克隆抗體（MAb）：銪標(biāo)記的抗細(xì)胞因子抗體MAb1和XL665標(biāo)記的抗細(xì)胞因子抗體MAb2。MAb1和MAb2分別與細(xì)胞因子結(jié)合，發(fā)生能量共振轉(zhuǎn)移，產(chǎn)生熒光信號(hào)，熒光信號(hào)與細(xì)胞因子的濃度成正比。

HTRF生物過(guò)程和抗體藥物研發(fā)解決方案
在治療性抗體的研發(fā)和篩選過(guò)程中，通常需要經(jīng)過(guò)以下步驟：首先基于生物化學(xué)結(jié)合反應(yīng)，利用HTRF或ELISA技術(shù)從幾千至上萬(wàn)的樣本庫(kù)中篩選目標(biāo)候選樣本。在確定候選樣本可以與表面受體結(jié)合后，進(jìn)一步從細(xì)胞水平確定候選樣本與細(xì)胞的結(jié)合能力。隨后，確定候選樣本的Kd，Kon/off 和 IC50值，對(duì)抗體藥物的親和力等特性進(jìn)行確定，后一步是進(jìn)行抗體藥物的功能試驗(yàn)，如抗體藥物激活細(xì)胞表面受體后，cAMP和IP-One的表達(dá)水平等等