近十年來流式細(xì)胞儀已經(jīng)成為臨床醫(yī)生、免疫學(xué)家和細(xì)胞生物學(xué)家*的工具，這項(xiàng)技術(shù)在不斷進(jìn)步。流式細(xì)胞儀的多參數(shù)細(xì)胞分析這一*的功能讓大多數(shù)細(xì)胞分析成為了可能。Coon首先提出了熒光抗體標(biāo)記細(xì)胞內(nèi)的目的蛋白技術(shù)，在20世紀(jì)80年代，細(xì)胞亞群僅僅通過檢測(cè)單一的細(xì)胞表面標(biāo)志物來確定，使用的單抗和熒光素很受限制?；虮磉_(dá)技術(shù)的誕生和新的單抗以及熒光素的獲得使更復(fù)雜的多參數(shù)分析成為可能。

1. 常用熒光素的種類及特性

1）. FITC（Fluorescein）又稱異硫氰酸熒光素，其標(biāo)記的抗體適用于所有配備488nm氬離子激光器的流式細(xì)胞儀；FITC 的大發(fā)射波長(zhǎng)為525nm，在流式細(xì)胞儀的FL1通道檢測(cè)。

2). PE（R-Phycoerythrin）又稱藻紅蛋白，有R-PE和RD1的別稱，其標(biāo)記的抗體適用于所有配備488nm氬離子激光器的流式細(xì)胞儀；PE 的大發(fā)射波長(zhǎng)為575nm，在流式細(xì)胞儀的FL2通道檢測(cè)。

3). PE-TR（PE-TexasRed）/ECDPE-TR又名ECD，是由PE和TexasRed（TR）組合而成的Tandem熒光素；其標(biāo)記的抗體適用于所有配備488nm氬離子激光器的流式細(xì)胞儀；PE-TR的大發(fā)射波長(zhǎng)為 615nm，在流式細(xì)胞儀的FL3通道檢測(cè)；PE-TR標(biāo)記的抗體可用于毫瓦級(jí)激光器的小流式細(xì)胞儀，也適用于配備有全功率激光器的大流式分選儀。

4). PI（PropidiumIodide）又稱碘化丙啶，其標(biāo)記的抗體適用于所有配備488nm氬離子激光器的流式細(xì)胞儀；PI的大發(fā)射波長(zhǎng)為617nm。在流式細(xì)胞儀的FL3通道檢測(cè)。

5). PE-Cy5（TRI-COLOR，TC）又稱TRI-COLOR或TC，是由PE和Cy5組合而成的Tandem熒光素；其標(biāo)記的抗體適用于所有配備488nm氬離子激光器的流式細(xì)胞儀；PE-Cy5 的大發(fā)射波長(zhǎng)為670nm，在流式細(xì)胞儀上用FL3通道檢測(cè)；PE-Cy5 標(biāo)記的抗體可用于毫瓦級(jí)激光器的小流式細(xì)胞儀，也適用于配備有全功率激光器的大流式分選儀。

6). PerCP（Peridinin-Chlorophyll-ProteinComplex）多甲藻黃素-葉綠素-蛋白質(zhì)復(fù)合物，其標(biāo)記的抗體適用于所有配備488nm氬離子激光器的流式細(xì)胞儀；PerCP的大發(fā)射波長(zhǎng)為677nm。在流式細(xì)胞儀的FL3通道檢測(cè)。

7). APC（Allophycocyanin）又稱別藻藍(lán)蛋白，其標(biāo)記的抗體適用于配備氦氖激光器發(fā)射波長(zhǎng)為633nm的多色流式細(xì)胞儀；APC大發(fā)射波長(zhǎng)為660nm，在流式細(xì)胞儀中只有配有雙激光器的FL4才能檢測(cè)。

8). APC-Cy7是由APC 和Cy7組合而成的Tandem熒光素；其標(biāo)記的抗體適用于配備氦氖激光器發(fā)射波長(zhǎng)為633nm的多色流式細(xì)胞儀，APC-Cy7主要用于四色以上的流式細(xì)胞術(shù)。

2. 常見熒光素?zé)晒鈴?qiáng)度比較

熒光的強(qiáng)度與染色指數(shù)(Stain Index)有關(guān)，染色指數(shù)的計(jì)算：Stain Index=D/W，染色指數(shù)越高，熒光強(qiáng)度越好；染色指數(shù)較低，染色強(qiáng)度相對(duì)較差：

3. 多色流式細(xì)胞檢測(cè)中熒光素選擇的原則

根據(jù)機(jī)器配置選擇熒光素

比如 BD calibour 流式儀，配置有兩色激光，能夠做 4 個(gè)通道的熒光素，需根據(jù)對(duì)應(yīng)的激光激發(fā)波長(zhǎng)和檢測(cè)通道選擇合適的熒光抗體

多色標(biāo)記熒光素搭配原則：每個(gè)通道只能選擇一種熒光素；各個(gè)通道之間的熒光素可以隨意搭配。FACSCalibur 常用的四色搭配：FITC, PE, PerCP, APC