??ELISA試劑盒操作篇丨常見問題及解決方案

??一、為什么所有試劑和檢測樣本要平衡至室溫后再進(jìn)行加樣操作?

??溫度是ELISA結(jié)合反應(yīng)的重要影響因素。為了使所有樣本在一致的溫度下反應(yīng)，實(shí)驗(yàn)前務(wù)必將所有試劑平衡至室溫，包括檢測樣本。避免因溫度的動(dòng)力學(xué)反應(yīng)差異而導(dǎo)致ELISA檢測結(jié)果的不準(zhǔn)確。

??二、如何獲得良好線性的標(biāo)準(zhǔn)曲線?

??按照推薦方式保存標(biāo)準(zhǔn)品;溶解標(biāo)準(zhǔn)品之前需短暫離心，收集粉末;確保標(biāo)準(zhǔn)品溶解和混勻(大約10min)，然后再進(jìn)行后續(xù)的系列稀釋步驟，確保每一步都充分混勻且移液;顯色的恰當(dāng)終止;選擇合適的數(shù)學(xué)擬合方程繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

??三、ELISA實(shí)驗(yàn)為什么必須設(shè)置復(fù)孔?

??為獲得準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，強(qiáng)烈建議標(biāo)準(zhǔn)品及樣本進(jìn)行復(fù)孔檢測。因?yàn)閺?fù)孔檢測可以：

??計(jì)算平均值，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確;

??解決實(shí)驗(yàn)中誤操作造成的跳孔現(xiàn)象;

??計(jì)算CV值，對(duì)實(shí)驗(yàn)的操作和試劑盒的度進(jìn)行評(píng)估。

??四、為什么實(shí)驗(yàn)過程中孵育、洗滌需要振蕩?如何振蕩?

??振蕩孵育使反應(yīng)充分，振蕩洗滌使背景干凈。建議使用酶標(biāo)專用96孔微孔板振蕩器。

??孵育過程振蕩，可以加快、加強(qiáng)抗原抗體分子間的相互碰撞接觸，使得反應(yīng)過程加，OD值通常會(huì)比未振蕩孵育的結(jié)果要高;洗滌過程振蕩，可以使洗板干凈，在很大程度上 能降低背景值，同時(shí)可以提高試劑盒檢測的靈敏度。

??五、何時(shí)終止ELISA反應(yīng)?

??ELISA實(shí)驗(yàn)終需要酶催化底物顯色反應(yīng)來完成，在佳時(shí)間終止反應(yīng)是ELISA實(shí)驗(yàn)成功的重要因素。在HRP-TMB酶促反應(yīng)系統(tǒng)中，S5出現(xiàn)淡藍(lán)色，S1 – S3有明顯的階梯型藍(lán)色，便需要終止反應(yīng);或者根據(jù)高濃度標(biāo)準(zhǔn)品孔在620nm的OD值來決定，OD620=0.9-0.95之間時(shí)即可終止。

??六、為什么酶標(biāo)儀讀數(shù)時(shí)必須選用雙波長?

??首先，酶標(biāo)儀使用前務(wù)必預(yù)熱10-15min，使測讀結(jié)果穩(wěn)定。其次，ELISA實(shí)驗(yàn)采用雙波長測定吸光度，可以排除單波長檢測時(shí)的測定干擾(標(biāo)本的濃度，干擾色等)。一般采用大波長作為參照波長，在參照波長下，檢測物的吸光值小，檢測波長和參照波長的吸光值之差可以消除非特異性吸收;因此，雙波長測定，可大限度的消除指紋、雜質(zhì)及不透光的物質(zhì)對(duì)酶標(biāo)儀讀數(shù)帶來的誤差，以保證實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確度。

??Elisa試劑盒上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品，勵(lì)志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠(yuǎn)銷多個(gè)國家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經(jīng)營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準(zhǔn)則、以市場需求為導(dǎo)向，不斷開發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務(wù)質(zhì)量"的方針。