蛋白快速銀染試劑盒的應(yīng)用

　　蛋白快速銀染試劑盒是一種快速的可用于SDS-PAGE或非變性PAGE等蛋白銀染染色的試劑盒，該試劑盒含有增敏步驟，可明顯降低背景。

　　其優(yōu)點(diǎn)還在于：

　　1、操作簡單、快速;

　　2、可用于2D凝膠的銀染，并可進(jìn)行后續(xù)的質(zhì)樸檢測;

　　3、目的條帶清晰;

　　4、不含甲醇。Protein Fast Silver Stain Kit與Protein Silver Stain Kit相比，前者操作速度更快，但檢測靈敏度可能低于后者，尤其是在檢測小分子量蛋白質(zhì)的時候。本試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

　　蛋白快速銀染試劑盒操作步驟：

　　1.準(zhǔn)備工作：以下操作以8.5×5.5cm、厚度為1.0mm的凝膠為例，以凝膠全部浸沒到溶液為準(zhǔn)，一般用量是25ml，對于凝膠體積較大的，各溶液的使用量需按凝膠體積比例放大。整個銀染過程應(yīng)在搖床上進(jìn)行，搖床轉(zhuǎn)速控制在60～70rpm。提前配制固定液，即按無水乙醇:冰乙酸:去離子水=5:1:4的比例配制。提前配制洗滌液，即按無水乙醇:去離子水=1:4的比例配制。

　　2.水洗：電泳結(jié)束后，取凝膠放入去離子水中清洗2次，每次5min。

　　3.固定：取凝膠放入50～100ml固定液中，在搖床上室溫?fù)u動15～20min，重復(fù)固定步驟1次。

　　4.洗脫：取凝膠放入洗滌液中清洗2次，每次5min。

　　5.水洗：去離子水清洗凝膠2次，每次5min。

　　6.增敏：配制銀染增敏工作液，即取Silver Stain Sensitizer(500×)0.1ml加入到50ml去離子水中，混勻，即1×Silver Stain Sensitizer，一般應(yīng)2h內(nèi)用完。室溫下用1×Silver Stain Sensitizer孵育凝膠2min，立即用去離子水清洗凝膠2次，每次1min。

　　7.銀染：配制銀染工作液，即取Silver Stain(100×)0.5ml加入到50ml去離子水中，混勻，即得1×Silver Stain，一般應(yīng)2h內(nèi)用完。取凝膠入1×Silver Stain，在搖床上室溫?fù)u動10～20min。

　　8.水洗：棄液，在搖床上用去離子水清洗凝膠2次，每次30s，搖動速度在60～70rpm?？偟乃磿r間應(yīng)控制在1.5min內(nèi)。

　　9.顯影：配制銀染顯影工作液，即取Silver Stain Developer(5×)10ml加入到40ml去離子水中，混勻，即1×Silver Stain Developer，一般應(yīng)30min內(nèi)用完。清洗凝膠后，立即置于1×Silver Stain Developer中，室溫孵育2～10min，直至蛋白條帶清晰可見。一般顯色30s后就會出現(xiàn)棕色沉淀，繼續(xù)顯影2～3min，亦可延長至5min以上，如果顯影效果不佳，可重新更換1×Silver Stain Developer繼續(xù)顯影。

　　10.迅速用去離子水清洗凝膠以避免顯影過度，背景染色。立即加入銀染終止液，搖床上搖動10min，以終止顯色反應(yīng)。(配制銀染終止液，即取Silver Stain Stop Buffer(10×)10ml加入到90ml去離子水中，混勻，即1×Silver Stain Stop Buffer，一般應(yīng)24h內(nèi)用完。)

　　11.保存：棄終止液，加入去離子水50ml，搖床上搖動2～5min，棄液。短期保存于新鮮去離子水，長期保存可以制備干膠。

　　蛋白快速銀染試劑盒 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品，勵志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠(yuǎn)銷多個國家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經(jīng)營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準(zhǔn)則、以市場需求為導(dǎo)向，不斷開發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務(wù)質(zhì)量"的方針。古朵試劑盒