細(xì)胞衰老特異性β-半乳糖苷酶檢測試劑盒產(chǎn)品說明書

　　主要用途

　　細(xì)胞衰老特異性β-半乳糖苷酶檢測試劑是一種旨在以X-Gal為底物，通過細(xì)胞內(nèi)β-半乳糖苷酶在酸性條件下穩(wěn)定表達(dá)，催化生成深藍(lán)色的沉積產(chǎn)物，從而在光學(xué)顯微鏡下觀察到藍(lán)色表達(dá)的細(xì)胞作為細(xì)胞復(fù)制性衰老(replicative senescence)的分子特征來識別和探測衰老細(xì)胞的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)由大師級科學(xué)家精心研制、成功實驗證明的。廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)研究。其適用于各種人體和動物細(xì)胞或活體內(nèi)(in vivo)檢測。產(chǎn)品即到即用，性能穩(wěn)定，參數(shù)優(yōu)化，著色敏感，堪稱上同類產(chǎn)品zui為上佳。

　　技術(shù)背景

　　細(xì)胞復(fù)制性衰老是細(xì)胞控制其生長潛能的保障機制。衰老細(xì)胞停滯在細(xì)胞周期的G1期，表現(xiàn)出細(xì)胞扁平、脹大、顆粒增多的形態(tài)特征，尤其在酸性條件下，細(xì)胞內(nèi)β-半乳糖苷酶活性增加，而成為細(xì)胞衰老的生物學(xué)標(biāo)記。

　　產(chǎn)品內(nèi)容

　　清理液(Reagent A)毫升

　　固定液(Reagent B)毫升

　　酸性液(Reagent C)毫升

　　稀釋液(Reagent D)毫升

　　染色液(Reagent E)毫升

　　說明書1份

　　保存方式

　　保存 染色液(Reagent E)在-20℃冰箱里;其余的保存在4℃冰箱里; 稀釋液(Reagent D)和 染色液(Reagent E)用鋁箔封裹，避免光照;有效保證6月。

　　用戶自備

　　2毫升離心管：用于配制染色工作液。

　　15毫升錐形離心管：用于配制染色工作液。

　　恒溫培養(yǎng)箱：用于染色孵育。

　　光學(xué)顯微鏡：用于觀察染色后的細(xì)胞。

　　實驗步驟：

　　操作一、25cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶染色

　　實驗開始前，將試劑盒里的 染色液(Reagent E)從-20℃的冰箱里取出，放進(jìn)冰槽里等待溶化。然后移取xx毫升 稀釋液(Reagent D)到2毫升離心管，加入xx微升 染色液(Reagent E)，混勻后，放進(jìn)37℃恒溫水槽里預(yù)熱，標(biāo)記為 染色工作液。然后進(jìn)行下列操作：

　　小心抽去25cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)液。

　　小心加入xx毫升 清理液(Reagent A)，清洗生長中的細(xì)胞表面。

　　小心抽去清理液。

　　小心加入xx毫升 固定液(Reagent B)，覆蓋整個生長表面。

　　在室溫下孵育5分鐘。

　　小心抽去固定液。

　　小心加入xx毫升 酸性液(Reagent C)，清洗細(xì)胞表面。

　　小心抽去酸性液。

　　重復(fù)實驗步驟7和8一次。

　　小心加入xx毫升 染色工作液，覆蓋整個細(xì)胞表面。

　　放進(jìn)37℃培養(yǎng)箱，孵育3小時至16小時，或細(xì)胞呈現(xiàn)藍(lán)色(注意：避免液體蒸發(fā))。

　　在光學(xué)顯微鏡下觀察和計數(shù)：表達(dá)衰老特異性β- 半乳糖苷酶的細(xì)胞為陽性細(xì)胞，呈現(xiàn)藍(lán)色。

　　操作二、24孔細(xì)胞培養(yǎng)板染色

　　實驗開始前，將試劑盒里的 染色液(Reagent E)從-20℃的冰箱里取出，放進(jìn)冰槽里等待溶化。然后移取xx毫升 稀釋液(Reagent D)到15毫升錐形離心管，加入xx微升 染色液(Reagent E)，混勻后，放進(jìn)37℃恒溫水槽里預(yù)熱，標(biāo)記為 染色工作液。然后進(jìn)行下列操作。

　　1.小心抽去24孔細(xì)胞培養(yǎng)板里的培養(yǎng)液。

　　2.每孔加入xx微升 清理液(Reagent A)，清洗生長中的細(xì)胞表面。

　　3.小心抽去每孔里的清理液。

　　4.每孔加入xx微升 固定液(Reagent B)，覆蓋整個生長表面。

　　5.在室溫下孵育5分鐘。

　　6.小心抽去固定液。

　　7.每孔加入xx微升 酸性液(Reagent C)，清洗細(xì)胞表面。

　　8.小心抽去酸性液。

　　9.重復(fù)實驗步驟7和8一次。

　　10.每孔加入xx微升 染色工作液，覆蓋整個細(xì)胞表面。

　　11.放進(jìn)37℃培養(yǎng)箱，孵育3小時至16小時，或細(xì)胞呈現(xiàn)藍(lán)色(注意：避免液體蒸發(fā))。

　　12.在光學(xué)顯微鏡下觀察和計數(shù)：表達(dá)衰老特異性β- 半乳糖苷酶的細(xì)胞為陽性細(xì)胞，呈現(xiàn)藍(lán)色。

　　注意事項

　　本產(chǎn)品為100次(4個24孔板)或20次(20個25cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶)操作

　　操作時，須戴手套

　　本產(chǎn)品的參數(shù)：固著劑種類和濃度、pH、生色底物的選擇和濃度等達(dá)到*化

　　使用時，避免污染母液，否則出現(xiàn)絮狀沉淀，影響實驗效果

　　染色工作液避免光照

　　細(xì)胞β-半乳糖苷酶活性強，孵育3小時即顯示陽性;細(xì)胞β-半乳糖苷酶活性弱，則需要孵育24小時

　　細(xì)胞染色zui長孵育時間為24小時

　　孵育時避免液體蒸發(fā)

　　本產(chǎn)品染色敏感，甚至對于微弱表達(dá)的酶活性仍然顯色清晰;用戶可以根據(jù)實際情況調(diào)整孵育時間和染色工作液濃度，使染色恰到好處細(xì)胞呈現(xiàn)藍(lán)色的部位為衰老細(xì)胞特異性β-半乳糖苷酶活性的地方染色后的細(xì)胞樣品可以在4℃冰箱里保存，同樣須避免光照。

　　本產(chǎn)品適合各種規(guī)格的培養(yǎng)細(xì)胞：載玻片，載玻片培養(yǎng)皿，35mm培養(yǎng)皿，和各種培養(yǎng)孔板，須相應(yīng)調(diào)整處理液：

　　操作容器建議處理液規(guī)格：

　　載玻片100微升

　　載玻片培養(yǎng)皿1毫升

　　35mm培養(yǎng)皿1毫升

　　96孔培養(yǎng)板100微升

　　48孔培養(yǎng)板200微升

　　24孔培養(yǎng)板500微升

　　12孔培養(yǎng)板1毫升

　　6孔培養(yǎng)板2毫升

　　25cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶3毫升

　　本公司提供系列細(xì)胞衰老分析試劑產(chǎn)品

　　細(xì)胞衰老特異性β-半乳糖苷酶檢測試劑盒 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品，勵志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠(yuǎn)銷多個國家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經(jīng)營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準(zhǔn)則、以市場需求為導(dǎo)向，不斷開發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務(wù)質(zhì)量"的方針。古朵試劑盒