人轉(zhuǎn)錄因子E2F1試劑盒激活方法與檢測程序方法

　　人轉(zhuǎn)錄因子E2F1試劑盒激活方法：

　　1. 將450ul 標本稀釋液加入到一支 1.5ml 進口聚丙烯管中 , 再加 10ul 血清或血漿標本。

　　2. 加20ul 1 N HC I ,蓋緊，上下混勻。 2 - 8 ℃ 放置60± 2 分鐘。

　　3. 加20ul 1 N NaOH, 蓋緊，上下混勻。

　　4. 即用，或放-20/-70 ℃ 保存3 天。計算結(jié)果時乘 以稀釋倍數(shù) 50 。 ( 注意：不同的標本E2F1 的水平可能有較大差異，請根據(jù)實際情況靈活掌握稀釋度)

　　5. 細胞培養(yǎng)上清或組織勻漿 10 倍稀釋 (410ul 的標本稀釋液+ 50ul 樣本+ 20ul 的 1N HCI+20ul 的 1N NaOH) 。

　　檢測程序

　　1. 加樣：每孔各加入標準品或待測樣品(已激活) 100ul ，將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。

　　2. 洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌 4-6 次，向濾紙上印干。

　　3. 每孔中加入第一抗體工作液10 0ul 。將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。

　　4. 洗板：同前。

　　5. 每孔加酶標抗體工作液100ul 。將反應(yīng)板置 37 ℃ 3 0 分鐘。

　　6. 洗板：同前。

　　7. 每孔加入底物工作液100ul ，置 37 ℃ 暗處反應(yīng)15 分鐘。

　　8. 每孔加入100ul 終止液混勻。

　　9. 30分鐘內(nèi)用酶標儀在 45 0 nm 處測 吸光值。

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