ELISA實(shí)驗(yàn)干貨丨如何選擇試劑盒

　　要問(wèn)科研最怕遇到的糟心事，非買到科研試劑莫屬了，用不好的試劑無(wú)非導(dǎo)致兩種結(jié)果：實(shí)驗(yàn)失敗or被動(dòng)學(xué)術(shù)造假。ELISA試劑盒門檻較低，制假相對(duì)簡(jiǎn)單，常有不法商家打著種屬全、指標(biāo)全、現(xiàn)貨供應(yīng)的旗號(hào)來(lái)生產(chǎn)、銷售壞ELISA試劑盒，曾有老師吐槽“每個(gè)月都能收到好幾個(gè)從未聽(tīng)過(guò)的廠商向我ELISA試劑盒"。針對(duì)ELISA試劑盒真假問(wèn)題，我們整理了一些辨別經(jīng)驗(yàn)(購(gòu)買前and購(gòu)買后)，希望對(duì)大家有所幫助。

　　購(gòu)買前

　　1.選擇正規(guī)公司

　　進(jìn)口試劑盒盡量選擇Thermo、 R&D等公司;國(guó)產(chǎn)試劑盒一定要選擇大型正規(guī)企業(yè)，比如聯(lián)科生物。將“廠家名"、“ELISA"和“假貨"等關(guān)鍵詞在網(wǎng)上搜索，有的網(wǎng)站或論壇如丁香園等會(huì)有打假曝光平臺(tái)。正規(guī)廠商的ELISA試劑盒通常有技術(shù)發(fā)明支撐和ISO9001國(guó)際質(zhì)量體系認(rèn)證，且廠家會(huì)定期收集整理試劑盒的文獻(xiàn)引用情況，購(gòu)買前可向廠家索要相關(guān)材料加以核實(shí)。

　　2.試劑盒性能參數(shù)

　　向廠家索要或從其下載產(chǎn)品說(shuō)明書和質(zhì)控報(bào)告，查找ELISA試劑盒的關(guān)鍵質(zhì)控性能參數(shù)：準(zhǔn)確度(加標(biāo)回收率、稀釋線性)、精密度(板內(nèi)差、板間差)、靈敏度、樣本值、特異性、校準(zhǔn)。如果無(wú)法提供這些性能參數(shù)數(shù)據(jù)，則說(shuō)明試劑盒開(kāi)發(fā)過(guò)程不夠科學(xué)嚴(yán)謹(jǐn)，并未做試劑盒性能測(cè)試從而無(wú)法得到準(zhǔn)確真實(shí)的結(jié)果，也有極大可能是假貨試劑盒。

　　3. 不常見(jiàn)指標(biāo)的選擇

　　如需檢測(cè)不常見(jiàn)物種的樣本(如禽類、豬、羊等)，可選擇靠譜的生物網(wǎng)站或好的ELISA試劑盒供應(yīng)商。其實(shí)，“貨比三家"有時(shí)會(huì)有一些“驚喜"，也許你會(huì)發(fā)現(xiàn)：某個(gè)公司的說(shuō)明書除了指標(biāo)名稱不一致，其他內(nèi)容基本一樣;某個(gè)指標(biāo)，幾家公司試劑盒的性能參數(shù)是一樣…一定要記?。宏P(guān)于網(wǎng)上宣傳有所有種屬所有指標(biāo)ELISA試劑盒的公司，那真的是再謹(jǐn)慎也不為過(guò)。

　　4. 所有指標(biāo)常備現(xiàn)貨

　　抗體并不十分穩(wěn)定，針對(duì)非熱門研究指標(biāo)，廠家為保證產(chǎn)品質(zhì)量通常不會(huì)長(zhǎng)期備現(xiàn)貨，若承諾相對(duì)冷門的ELISA試劑盒能隨時(shí)發(fā)貨，那需謹(jǐn)慎考慮是否要選擇該供應(yīng)商。

　　購(gòu)買后

　　1.檢查

　　檢查說(shuō)明書、包裝盒的質(zhì)量，通常不好偽劣產(chǎn)品為了降低成本，印刷的質(zhì)量會(huì)比較差。其次仔細(xì)閱讀說(shuō)明書，如上所示查找ELISA的性能指標(biāo)。

　　2.實(shí)驗(yàn)

　　(1)利用干擾實(shí)驗(yàn)即可鑒別ELISA試劑盒是否檢測(cè)目的抗原

　　a. 將針對(duì)試劑盒特異性的重組蛋白抗原和試劑盒中的檢測(cè)抗體配置成antibody: antigen= 1:2的混合孵育液;

　　b. 37℃孵育15分鐘后，代替原試劑盒中的檢測(cè)抗體;

　　c. 后續(xù)操作按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行，加檢測(cè)抗體、酶復(fù)合物和底物;

　　d. 實(shí)驗(yàn)完畢后，檢測(cè)其標(biāo)準(zhǔn)曲線，如果標(biāo)準(zhǔn)曲線良好則說(shuō)明加入的目的抗原和試劑盒抗體不匹配，試劑盒檢測(cè)抗體針對(duì)的是非目的抗原，該試劑盒為假貨ELISA試劑盒;

　　e. 如果標(biāo)準(zhǔn)曲線無(wú)線性，則說(shuō)明試劑盒檢測(cè)抗體已被目的抗原中和或干擾，影響了其實(shí)際試劑盒抗體的檢測(cè)作用，則該試劑盒檢測(cè)抗體針對(duì)的是目的抗原。

　　(2)如果購(gòu)買了兩盒同一公司的ELISA試劑盒A和B，利用交叉實(shí)驗(yàn)即可鑒別ELISA試劑盒是否造假

　　a. 取出購(gòu)買的試劑盒A的包被板兩條;

　　b. 一條包被板加試劑盒A的標(biāo)準(zhǔn)品做標(biāo)準(zhǔn)曲線;

　　c. 另一條包被板加試劑盒B的標(biāo)準(zhǔn)品做標(biāo)準(zhǔn)曲線;

　　d. 后續(xù)操作按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行，加檢測(cè)抗體、酶復(fù)合物和底物;

　　e. 實(shí)驗(yàn)完畢后，檢測(cè)兩條標(biāo)準(zhǔn)曲線，如果兩條標(biāo)準(zhǔn)曲線一致則說(shuō)明兩個(gè)ELISA試劑盒檢測(cè)的同一個(gè)指標(biāo)而非A和B，即該試劑盒為假貨ELISA試劑盒;

　　f. 如果兩條標(biāo)準(zhǔn)曲線不一致則說(shuō)明兩個(gè)ELISA試劑盒檢測(cè)的不同指標(biāo)，試劑盒A只能檢測(cè)A，不能檢測(cè)B，即該試劑盒為正常的ELISA試劑盒。

　　上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品，勵(lì)志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠(yuǎn)銷多個(gè)國(guó)家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經(jīng)營(yíng)宗旨;牢固樹(shù)立“以客戶需求為準(zhǔn)則、以市場(chǎng)需求為導(dǎo)向，不斷開(kāi)發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務(wù)質(zhì)量"的方針。古朵試劑盒