綿羊Ⅱ型膠原(Col Ⅱ)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書

　　本試劑盒僅供研究使用。

　　檢測范圍：

　　使用目的：

　　本試劑盒用于測定綿羊血清、血漿及相關液體樣本中Ⅱ型膠原(Col Ⅱ)含量。

　　實驗原理

　　本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中綿羊Ⅱ型膠原(Col Ⅱ)水平。用純化的綿羊Ⅱ型膠原(Col Ⅱ)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入Ⅱ型膠原(ColⅡ)，再與 HRP標記的Ⅱ型膠原(Col Ⅱ)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物 TMB顯色。TMB在 HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的。顏色的深淺和樣品中的Ⅱ型膠原(Col Ⅱ)呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD值)，通過標準曲線計算樣品中綿羊Ⅱ型膠原(Col Ⅱ)濃度。

　　試劑盒組成：

　　綿羊Ⅱ型膠原(Col Ⅱ)酶聯(lián)免疫分析標本要求

　　1.標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融

　　2.不能檢測含NaN3的樣品，因 NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

　　操作步驟：

　　1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

　　2. 加樣：分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl，然后再加待測樣品 10µl(樣品zui終稀釋度為 5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

　　溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育30分鐘。

　　配液：將 30倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30倍稀釋后備用

　　洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30秒后棄去，如此重復 5次，拍干。

　　加酶：每孔加入酶標試劑 50µl，空白孔除外。

　　溫育：操作同 3。

　　洗滌：操作同 5。

　　顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

　　10.終止：每孔加終止液 50µl，終止反應(此時藍色立轉)。

　　11.測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。測定應在加終止液后 15分鐘以內進行。

　　操作程序總結：

　　計算

　　以標準物的濃度為橫坐標， OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與 OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。

　　綿羊Ⅱ型膠原(Col Ⅱ)酶聯(lián)免疫分析注意事項

　　1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

　　2.濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

　　3.各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在 5分鐘內，如標本數(shù)量多，推選使用排槍加樣。

　　4.請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本 OD值大于標準品孔*孔的 OD值)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

　　5.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

　　6.底物請避光保存。

　　7.嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

　　8.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

　　9.本試劑不同批號組分不得混用。

　　10.如與英文說明書有異，以英文說明書為準。

　　保存條件及有效期

　　1.試劑盒保存：;2-8℃。

　　2.有效期：6個月

　　Elisa試劑盒 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術相關產品，勵志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產品遠銷多個國家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準則、以市場需求為導向，不斷開發(fā)高質量的新產品，提供客戶滿意的綜合服務質量"的方針。古朵試劑盒

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