姬姆薩染色法的操作步驟及注意事項

　　姬姆薩染色法簡稱姬氏染色，是用天青色素、伊紅、次甲藍混合而成的姬姆薩染料對血液涂抹標本、血球、瘧原蟲、立克次體以及骨髓細胞、脊髓細胞等標本進行染色的染色方法。染前用蛋白酶等進行處理，然后再用姬姆薩染液染色，在染色體上，可以出現(xiàn)不同濃淡的橫紋樣著色。姬姆薩染液可將細胞核染成紫紅色或藍紫色，胞漿染成粉紅色，在光鏡下呈現(xiàn)出清晰的細胞及染色體圖像。

　　作用機理：

　　姬姆薩染色液由天青，伊紅組成。染色原理和結(jié)果與瑞特染色法基本相同。嗜酸性顆粒為堿性蛋白質(zhì)，與酸性染料伊紅結(jié)合，染粉紅色，稱為嗜酸性物質(zhì)，細胞核蛋白和淋巴細胞胞漿為酸性，與堿性染料美藍或天青結(jié)合，染紫藍色，稱為嗜堿性物質(zhì)，中性顆粒呈等電狀態(tài)與伊紅和美藍均可結(jié)合，染淡紫色，稱為中性物質(zhì)。

　　PH對細胞染色有一些影響。細胞里各種成分均不蛋白質(zhì)，因為蛋白質(zhì)系兩性電解質(zhì)，帶電荷隨溶液PH而定，在偏酸性環(huán)境里下在電荷增多，易和伊紅結(jié)合，染色為偏紅，在偏三性環(huán)境里負電荷增多，易和美藍或天青結(jié)合，染色偏藍。所以細胞染色對氫離子濃度十分敏感，染色用正經(jīng)片一定清潔，要無酸堿污染。配制頊特液一定用優(yōu)質(zhì)甲醇，稀釋染色一定用緩沖液，沖洗一定用水應(yīng)近中性，不然可導(dǎo)致各種細胞染色反應(yīng)異常，以致于識別困難，甚至造成錯誤的。一般性操作技術(shù)血涂片制備、細胞染色、顯微檢查、血液病診斷、染色不良。

　　操作步驟：

　　1、滴加姬姆染色液A液(0.5-0.8ml)于涂片上，并讓染液覆蓋整個標本涂色片染色1分鐘。

　　2、將姬姆薩染色液B液滴加于A液上面(滴加之量為A液的2-3倍)以洗耳球吹出微風使液面產(chǎn)生漣漪狀，使兩液充分混合，染色3-10分鐘。

　　3、水洗(沖洗時不能先倒掉染液，應(yīng)以流水沖去，以防有沉渣沉淀在標本上)。

　　4、干燥，鏡檢。

　　注意事項：

　　1、染色時間要視何種標本，涂片薄厚，有核細胞多少，何種細胞及溫室等而定;通常染血液涂片時滴加B液后染1-3分鐘即可，染骨髓片則應(yīng)不少于5分鐘。

　　2、做骨髓涂片時因為骨髓纖維蛋白含量較高，凝固較快，所以涂片過程要快。

　　骨髓不可用草酸鹽抗凝，否則會使血細胞核變形，核染色質(zhì)致密，胞質(zhì)空泡形成，出現(xiàn)草酸鹽結(jié)晶。

　　3、染液量需充足，勿使染液蒸發(fā)干燥，以防染液沉著于涂片上。

　　4、做血細胞染色時，當天氣寒冷或濕度較大時，應(yīng)于37T溫箱中保濕促干，以免細胞變形縮小。

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