ELISA實(shí)驗(yàn)丨試劑盒標(biāo)準(zhǔn)曲線不佳

　　ELISA實(shí)驗(yàn)加入顯色底物后，標(biāo)準(zhǔn)品有顏色，但結(jié)果分析發(fā)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)品最高點(diǎn)吸光值偏低或偏高、標(biāo)準(zhǔn)曲線無梯度等等，古朵生物技術(shù)總結(jié)如下原因：

　　一、標(biāo)準(zhǔn)曲線最高點(diǎn)吸光值偏高，超出儀器檢測范圍

　　ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線最高點(diǎn)的吸光值一般在3.0以下，若太高超出儀器檢測范圍，顯示OVER FLOW，可能原因：

　　序號可能原因解決方法

　　1、如OD絕對值靠譜，則顯色過度TMB顯色體系中建議根據(jù)S1，S2顏色進(jìn)行判斷， 當(dāng)S1，S2深藍(lán)色，有明顯梯度，S5有淡藍(lán)色時(shí)即可終止。

　　2、僅作單波長檢測由于參考波長讀取非特異性檢測，如指紋、劃痕、水漬等， 對結(jié)果也有影響。建議最終結(jié)果以雙波長為最準(zhǔn)確。

　　二、標(biāo)準(zhǔn)曲線最高點(diǎn)吸光值偏低

　　ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線最高點(diǎn)的吸光值一般要在0.8以上，若小于0.8，可能的原因：

　　序號可能原因解決方法

　　1、粉末標(biāo)準(zhǔn)品未充分溶解粉末標(biāo)準(zhǔn)品按說明書加一定體積的液體后，輕柔混勻， 室溫靜置30分鐘，充分溶解。

　　2、標(biāo)準(zhǔn)品反復(fù)凍融標(biāo)準(zhǔn)品反復(fù)凍融后活性降低。

　　3、孵育溫度、時(shí)間按說明書要求孵育條件進(jìn)行孵育。

　　4、顯色時(shí)間控制TMB顯色體系中建議根據(jù)S1，S2顏色進(jìn)行判斷，當(dāng)S1，S2深藍(lán)色，有明顯梯度，S5有淡藍(lán)色時(shí)即可終止。

　　三、標(biāo)準(zhǔn)曲線無梯度

　　ELISA 實(shí)驗(yàn)中標(biāo)準(zhǔn)品2倍倍比稀釋，但結(jié)果分析標(biāo)準(zhǔn)曲線沒有梯度，可能的原因：

　　序號可能原因解決方法

　　1、樣品或標(biāo)準(zhǔn)品污染避免污染

　　2、錯(cuò)誤的樣品或標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋按照說明書稀釋

　　3、偶聯(lián)抗體濃度過高按照說明書調(diào)整到最佳的濃度

　　4、TMB底物孵育時(shí)間過長調(diào)整到合適的孵育時(shí)間

　　5、錯(cuò)誤的孵育時(shí)間或溫度按照說明書

　　6、孵育時(shí)未加蓋導(dǎo)致溶液揮發(fā)和污染貼封片或加蓋

　　總結(jié):

　　得到的ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線，需要注意幾點(diǎn)：

　　1、 充分溶解標(biāo)準(zhǔn)品;

　　2、 標(biāo)準(zhǔn)品避免反復(fù)凍融;

　　3、 梯度稀釋標(biāo)準(zhǔn)品注意混勻。

　　ELISA試劑盒 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品，勵(lì)志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠(yuǎn)銷多個(gè)國家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經(jīng)營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準(zhǔn)則、以市場需求為導(dǎo)向，不斷開發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務(wù)質(zhì)量"的方針。