對(duì)于抗體純化方法及實(shí)驗(yàn)步驟您了解多少？

　　1.鹽析法(飽和硫酸銨沉淀法)

　　該純化方法是基于在待純化免疫血清中加入飽和硫酸銨溶液，由于抗體也是一種蛋白質(zhì)，其在水溶液中的溶解度是由其本身攜帶的親水基團(tuán)數(shù)和電荷數(shù)決定的，當(dāng)我們向抗血清中加入飽和硫酸銨溶液后，硫酸根離子和銨根離子與抗體競(jìng)爭(zhēng)溶液中的水分子，因?yàn)榱蛩岣x子和銨根離子與抗體分子相比，具有更強(qiáng)的親水性，因此抗體分子表面的水化膜被破壞，同時(shí)其暴露出來的帶電基團(tuán)被溶液中的鹽離子所中和進(jìn)而導(dǎo)致其溶解度大大降低，依據(jù)此原理從而將其從抗血清中分離。

　　2.正辛酸-飽和硫酸銨沉淀法

　　該純化方法原理是：正辛酸在偏酸條件下，能與抗血清中或者小鼠腹水中的雜蛋白結(jié)合，在等電點(diǎn)附近將其沉淀，IgG類抗體則存在于上清液中，再利用飽和硫酸銨沉淀法即可進(jìn)一步提純。

　　3.Protein A和protein G純化法

　　基本原理：protein A和proteiin G 可以和抗體IgG分子的Fc段特異性結(jié)合。Protein A和proteinG 作為配基可以被偶聯(lián)到瓊脂糖凝膠上，當(dāng)抗血清從中流過時(shí)，特異性的IgG就與配基結(jié)合，其他雜蛋白則穿流而過。因兩種蛋白純化抗體時(shí)對(duì)不同宿主的抗體的結(jié)合能力不同，我們需要具體情況具體對(duì)待，分別選擇protein A 或者protein G,或者是protein A/protein G組合。一般推薦小鼠單抗IgG2a,IgG2b,IgG3，兔，人，豬的多克隆抗體用protein A純化，而小鼠單抗IgG1, 大鼠單抗，小鼠，大鼠，山羊的多克隆抗體則選擇用protein G純化。

　　4.免疫親和純化法

　　基本原理：將抗原作為一種配基偶聯(lián)在sepharose 4B上，血清等生物液體中的特異性抗體與sepharose 4B上的抗原進(jìn)行特異性結(jié)合，其他雜蛋白和雜抗體則不被結(jié)合，通過洗滌和洗脫等一系列實(shí)驗(yàn)步驟即可得到高純度的目標(biāo)抗體。本方法雖然和Protein A/G均被稱為親和純化方法，但是純化得到的最終的抗體還是有很大區(qū)別的，ProteinA/G純化得到的主要是非特異性的IgG類抗體，而本方法純化得到的主要是特異性的IgG類抗體，與其他純化方法相比，本方法純化得到的抗體其特異性好，純度最高。本純化方法的實(shí)驗(yàn)步驟與protein A/G純化方法基本一致，將實(shí)驗(yàn)方法三的配基protein A/G換成相應(yīng)的目標(biāo)抗原即可。

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