技術文章：ELISA技術中的抗原與抗體的反應

　　一、抗體的結(jié)構

　　抗體是能與抗原特異性結(jié)合的免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)。Ig分五類，即IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。與免疫測定有關的Ig主要為 IgG和IgM。Ig由兩個輕鏈(L)和兩個重鏈(H)的單體組成。Ig的輕鏈是相同的，有κ(kappa)和λ(Lambda)兩種型別。五類Ig的重鏈結(jié)構不同，這決定了它們的抗原性也不同。IgG和IgM的重鏈分別稱為γ(gamma)鏈和μ(mu )鏈。

　　重鏈和輕鏈的 N端的氨基酸排列順序因各種抗體而異，稱為可變區(qū)，分別用VH和VL表示。兩者構成抗體的抗原結(jié)合部位，只與相應的抗原決定簇匹配，發(fā)生特異性結(jié)合，是抗體專一性結(jié)合抗原的結(jié)構基礎。

　　IgG可被木瓜蛋白酶分解為三個區(qū)段，其中兩個相同的區(qū)段稱抗原結(jié)合片段(Fab)。每個Fab都保存結(jié)合抗原的能力，但只有一個抗原結(jié)合位點，是單價的，與抗原結(jié)合后不出現(xiàn)凝集或沉淀。另一區(qū)段稱Fc段，無抗體活性，但具有IgG的抗原性。

　　IgG可被w蛋白酶分解為兩個片段，一個Fab雙體，稱F(ab')2，能和兩個相同的抗原結(jié)合;另一片段類似Fc，隨后被分解成小分子多肽，無生物活性。

　　IgM是由五個單體組成的五聚體，含 10個重鏈和10個輕鏈，具有10個抗原結(jié)合價，由于空間位置的影響，只表現(xiàn)為五個抗原結(jié)合價。IgM分子量約為900000，IgG分子量約為150000。

　　機體被微生物感染后，先產(chǎn)生IgM抗體，然后產(chǎn)生IgG抗體。經(jīng)過一段時間，IgM抗體量逐漸減少而消失，而IgG抗體可長期存在，在疾病后可持續(xù)數(shù)年之久。IgM抗體一般為保護性抗體具有免疫性。

　　1.可逆性

　　抗原與抗體結(jié)合形成抗原抗體復合物的過程是一種動態(tài)平衡，其反應式為：

　　Ag+Ab→Ag·Ab

　　抗體的親和力(affinity)是抗原抗體間的固有結(jié)合力，可以用平衡常數(shù)K表示：

　　K=[Ag·Ab]/[Ag][Ab]

　　Ag·Ab的解離程度與K值有關。高親和力抗體的抗原結(jié)合點與抗原的決定簇在空間構型上非常適合，兩者結(jié)合牢固，不易解離。解離后的抗原或抗體均能保持原有的結(jié)構和活性，因此可用親和層析法來提純抗原或抗體。在抗血清中，特異性的IgG抗體僅占總IgG中的極小部分。用親和層析法提取的特異性抗體，稱為親和層析純抗體，應用于免疫測定中可得到更好的效果。

　　2.最適比例

　　在恒定量的抗體中加入遞增量的抗原形成抗體復合物(沉淀)的量。曲線的高峰部分是抗原抗體比例最合適的范圍，稱為等價帶(zone ofequivalence)。在等價帶前后分別為抗體過剩帶和抗原過剩帶。如果抗原或抗體極度過剩，則無沉淀物形成，在免疫測定中稱為帶現(xiàn)象(zone phenomenon)?？贵w過量稱為前帶(prezone)，抗原地過量稱為后帶(postzone)。在用免疫學方法測定抗原時，應使反應系統(tǒng)中有足夠的抗體量，否則測得的量會小于實際含量，甚至出現(xiàn)假陰性。

　　3.特異性

　　抗原抗體的結(jié)合實質(zhì)上只發(fā)生在抗原的抗原決定簇與抗體的抗原結(jié)合位點之間。由于兩者在化學結(jié)構和空間構型上呈互補關系，所以抗原抗體反應具有高度的特異性。例如乙肝中的表面抗原( HBsAg)、e抗原(HBeAg)和核心抗體(HBcAg)，隨來源于同一病毒，但僅與其相應的抗體結(jié)合，而不與另外兩種抗體反應。抗原抗體反應的這種特異性使免疫測定能在一非常復雜的蛋白質(zhì)化合物(例如血清)中測定某一特定的物質(zhì)，而不需先分離待檢物。

　　但是這種特異性也不是絕對的。假使兩種化合物有著部分相同的結(jié)構，在抗原抗體反應中可出現(xiàn)交叉反應。例如：絨毛膜促性y激素(hCG)和黃體生成激素(LH)均由α和β兩個亞單位組成，其結(jié)構的不同處在β亞單位，而兩者的α亞單位是同類的。用hCG免疫動物所得的抗血清中含有抗α-hCG和抗β-hCG兩種抗體，抗α-hCG抗體將與LH中的α酶位發(fā)生交叉反應。

　　4. 敏感性

　　在測定血清中某一物質(zhì)的含量時，化學比色法的敏感度為mg/ml水平，酶反應測定法的敏感度約為5~10μg/ml，免疫測定中凝膠擴散法和濁度法的敏感度與酶反應法相仿。標記的免疫測定的敏感度可提高數(shù)千倍，達ng/ml水平。例如，用放射免疫測定法或酶免疫測定法測定HBsAg，其敏感度可達0.1ng /ml。

　　如上所述，免疫測定是一種很敏感的測定方法，抗原抗體反應后直接測定形成的沉淀或濁度，敏感度可達5~10μg/ml。

　　5.酶免疫測定

　　酶免疫測定(enzymeimmunoassay)可分為均相(homogenous)和非均相(heterogenous)兩種類型。在均相EIA中可不需進行游離的和結(jié)合的標記物的分離而直接測定標記物。例如在某種條件下，抗原抗體反應后形成的酶標記抗原抗體復合物中的酶失去其對底物作用的活力，因而測出的酶活力直接反映游離的酶標記物。非均相EIA需先進行游離的和結(jié)合的標記物的分離。如前所述，固相載體可用作一種分離手段。這種固相酶免疫測定方法在1971年最初建立時稱為酶聯(lián)免疫吸附劑測定(enzymelinked immunosorbent assay)，簡稱ELISA，在國內(nèi)有譯作酶聯(lián)免疫吸附試驗的，雖然含義不確切，但已習用。

　　ELISA試劑盒 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術相關產(chǎn)品，勵志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠銷多個國家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經(jīng)營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準則、以市場需求為導向，不斷開發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務質(zhì)量"的方針。研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠銷多個國家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經(jīng)營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準則、以市場需求為導向，不斷開發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務質(zhì)量"的方針。