ELISA檢測試劑盒試驗(yàn)需恪守的原理

　　ELISA檢測試劑盒的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。

　　ELISA檢測試劑盒可以用于：(1)檢測大分子抗原和特異性抗體等;(2)具有快速、靈敏、簡便、載體易于標(biāo)準(zhǔn)化等優(yōu)點(diǎn)。

　　ELISA檢測試劑盒實(shí)驗(yàn)中的血清需采用血管收集血液，室溫血液自然凝固30分鐘，1000xg離心15分鐘左右，收集上清，分裝后，標(biāo)好號(hào)，-20°C或-80°C保存。運(yùn)輸是用干冰。

　　把ELISA檢測試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。對于一個(gè)旨在分離CD4陽性T的試劑盒來說，操作流程主要有以下幾步。首先，將樣品與anti-CD4抗體包被的磁珠共同孵育，使抗體與CD4+T結(jié)合。然后洗去不需要的非目標(biāo)(即不表達(dá)CD4的)，留下磁珠-抗體-復(fù)合物。將上述復(fù)合物與能結(jié)合anti-CD4抗體的二抗一起孵育胞，形成磁珠-抗體-二抗復(fù)合物。我們可以用磁鐵去除這種磁珠-抗體-二抗復(fù)合物，而所有的CD4+細(xì)胞留在上清中。最后，只需將上清轉(zhuǎn)移就可以進(jìn)行下游研究了。

　　ELISA檢測試劑盒試驗(yàn)有必要恪守以下3個(gè)中心原理：

　　(1)抗原或抗體能吸附于固相載體表面，并堅(jiān)持其免疫學(xué)活性;

　　(2)抗原或抗體可通過共價(jià)鍵與酶銜接構(gòu)成酶結(jié)合物，而此種酶結(jié)合物仍能堅(jiān)持其免疫學(xué)和酶學(xué)活性;

　　(3)酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后，可依據(jù)參加底物的色彩反響來斷定是否有免疫反響的存在，并且色彩反響的深淺是與標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比例的，ELISA檢測試劑盒可依據(jù)已知濃度的抗原或抗體的色彩反響的深淺制作規(guī)范曲線并依此計(jì)算出未知樣品中抗體或抗原的濃度。

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