ELISA競爭法和間接法的優(yōu)勢和用途

　　ELISA大致分為五種類型：直接法、間接法、競爭法、夾心法、捕獲包被法。在ELISA試劑盒中用得比較多的是雙抗體夾心法、競爭法和間接法。那么我先和你們講一講競爭法吧。

　　一、間接法ELISA

　　原理：將抗原與固相載體相連結(jié)，形成固相抗原。洗滌除去未結(jié)合的抗原及雜質(zhì)。加入特異性一抗與固相抗原相結(jié)合，形成固相抗原抗體復(fù)合物。經(jīng)洗滌后，加酶標(biāo)二抗。固相免疫復(fù)合物中的抗體與酶標(biāo)二抗結(jié)合，從而間接地標(biāo)記上酶。洗滌后，加底物顯色。

　　優(yōu)點：酶標(biāo)二抗可加強信號，提高靈敏度;靈活性更大，同一酶標(biāo)二抗可應(yīng)用于多種不同的一抗;不直標(biāo)一抗，可保留更多的免疫反應(yīng)性;成本更低，使用標(biāo)記抗體更少。

　　缺點：交叉反應(yīng)幾率升高。

　　二、競爭法ELISA

　　原理：競爭法ELISA更為復(fù)雜，通常用于檢測小分子如半抗原、激素、藥物等。樣品中待檢游離抗原與固定于固相載體上的抗原一起競爭相同的有抗體，當(dāng)樣品中的游離抗原越多，就可結(jié)合越多的抗體，而固相抗原只能結(jié)合較少的抗體。反之亦然。經(jīng)洗滌去除樣品中的抗原與抗體的結(jié)合物，只留下固相抗原與抗體的結(jié)合物。顯示經(jīng)計算可得樣品中抗原的含量。競爭法可根據(jù)實驗設(shè)置直接法、間接法或夾心法形式。

　　競爭法(Competitive ELISA)是用樣本中的游離抗體/抗原與固相的酶標(biāo)抗體/抗原競爭性結(jié)合的分析方法。當(dāng)游離抗體(或抗原)濃度越高，則能與固定抗原(或抗體)結(jié)合的酶標(biāo)抗體(或抗原)就越少，后續(xù)顯色就越淺，即與對照相比，顯色越淺，表示檢測樣本中抗體(或抗原)含量越高。該法特別適合小分子物質(zhì)的檢測也可用于檢測比較不純的樣本，且重復(fù)性好，但是檢測的靈敏度和專一性較差。競爭法測抗原常用于檢測小分子抗原及半抗原，這類抗原通常缺乏兩個以上的識別位點，不適用于雙抗夾心法進(jìn)行測定。該方法在商業(yè)化ELISA試劑盒中被廣泛運用。

　　接下來我再說一下間接法，間接法(Indirect ELISA)只能用于測定抗體，主要用于疾病的診斷，其優(yōu)點是只需要改變包被抗原，酶標(biāo)抗體是通用的。間接法使用了二抗增加信號強度，也使抗體的選擇多樣化，然而間接法容易產(chǎn)生交叉反應(yīng)。

　　標(biāo)簽：ELISA 試劑盒 抗原 抗體 酶標(biāo)二抗  酶標(biāo)抗體 古朵生物

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