小鼠雙鏈DNA(dsDNA)ELISA試劑盒

　　(用于血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液和其它生物體液內(nèi))

　　原理

　　本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心 ABC-ELISA法。用抗小鼠 dsDNA 單抗包被于酶標(biāo)板上，標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的 dsDNA與單抗結(jié)合，加入生物s化的抗小鼠dsDNA，形成免疫復(fù)合物連接在板上，辣根過氧化物酶標(biāo)記的Streptavidin與生物s結(jié)合，加入底物工作液顯藍(lán)色，最后加終止液硫酸，在450nm處測OD值，dsDNA濃度與OD值成正比，可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中dsDNA濃度。

　　試劑盒組成(2-8℃保存)

　　酶標(biāo)板(Coated Wells)96孔酶標(biāo)抗體工作液(Enzyme Conjugate)12ml

　　10×標(biāo)本稀釋液(Sample Buffer)12ml20×濃縮洗滌液(Wash Buffer)50ml

　　標(biāo)準(zhǔn)品(Standards)：1000ng/瓶2瓶底物工作液(TMB Solution)12ml

　　第一抗體工作液(Biotinylated Antibody)12ml終止液(Stop Solution)12ml

　　準(zhǔn)備試劑與收集血樣

　　1. 收集標(biāo)本：血清、血漿(EDTA)、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測，2-8℃保存48小時;更長時間須冷凍(-20 ℃或-70 ℃)保存，避免反復(fù)凍融。標(biāo)本可能需要稀釋,請先做預(yù)實(shí)驗(yàn),以確定稀釋倍數(shù)。

　　2. 標(biāo)準(zhǔn)品液配制：使用前加入0.5ml蒸餾水混勻，配成2000ng/ml的溶液。設(shè)標(biāo)準(zhǔn)管8管，第一管加標(biāo)本稀釋液900ul，第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液500ul。在第一管中加入2000ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液100ul混勻后用加樣器吸出500ul，移至第二管。如此反復(fù)作對倍稀釋，從第七管中吸出500ul棄去。第八管為空白對照。

　　3. 10×標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋(示例：1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水)。

　　4. 洗滌液：用重蒸水1:20稀釋(示例：1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水)

　　小鼠雙鏈DNA試劑盒檢測程序

　　1. 加樣：每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100ul，將反應(yīng)板充分混勻后置37℃120分鐘。

　　2. 洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次，向?yàn)V紙上印干。

　　3. 每孔中加入第一抗體工作液100ul。將反應(yīng)板充分混勻后置37℃60分鐘。

　　4. 洗板：同前。

　　5. 每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul。將反應(yīng)板置37℃30分鐘。

　　6. 洗板：同前。

　　7. 每孔加入底物工作液100ul，置37 ℃暗處反應(yīng)15分鐘。

　　8. 每孔加入100ul終止液混勻。

　　9. 30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm處測吸光值。

　　結(jié)果計(jì)算與判斷

　　1. 所有OD值都應(yīng)減除空白值后再行計(jì)算。

　　2. 以標(biāo)準(zhǔn)品200、100、50、25、12.5、6.25、3.12、0 ng/ml為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上作圖，畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線。

　　3. 根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應(yīng)dsDNA含量，再乘上稀釋倍數(shù)即可。

　　試劑盒性能

　　1. 靈敏度：最小的dsDNA 檢測濃度小于1.4ng/ml。

　　2. 特異性：可同時檢測重組或天然的小鼠dsDNA。不與小鼠其它細(xì)胞因子有交叉反應(yīng)。

　　3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板見變異系數(shù)均小于9.7%。

　　小鼠雙鏈DNA試劑盒注意事項(xiàng)

　　1. 以上標(biāo)準(zhǔn)孔及待測樣品均建議做復(fù)孔，每次測定應(yīng)同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

　　2. 洗滌過程很關(guān)鍵。洗滌不充分將導(dǎo)致精確度誤差及OD值錯誤地升高。

　　3. 板條開封后剩余板條要再封好，保持板條干燥。

　　4. 本試劑盒宜置4oC冰箱保存。

　　5. 本試劑盒僅用于科研，不能用于臨床診斷!

　　ELISA試劑盒上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品，勵志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠(yuǎn)銷多個國家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經(jīng)營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準(zhǔn)則、以市場需求為導(dǎo)向，不斷開發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務(wù)質(zhì)量"的方針。