小鼠白介素9(IL-9)酶聯(lián)分析檢測(cè)ELISA試劑盒使用說明

　　Elisa kit規(guī)格：48孔配置/96孔配置

　　標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液：1.5ml×1瓶

　　酶標(biāo)試劑：3 ml×1瓶(48)/6 ml×1瓶(96)

　　本試劑僅供研究使用 標(biāo)本：血清或血漿

　　使用目的：本試劑盒用于測(cè)定小鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本白介素9(IL-9)含量。

　　試驗(yàn)原理：

　　IL-9試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA).已知IL-9濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。先將IL-9和標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中IL-9的濃度呈比例關(guān)系。

　　試劑盒內(nèi)容及其配制

　　試劑盒成份(2-8℃保存)96孔配置48孔配置配制

　　96/48小鼠份酶標(biāo)板1塊板(96T)半塊板(48T)即用型

　　塑料膜板蓋1塊半塊即用型

　　標(biāo)準(zhǔn)品：80ng/ml1瓶(0.6ml)1瓶(0.3ml)按說明書進(jìn)行稀稀

　　空白對(duì)照1瓶(1.0ml)1瓶(0.5ml)即用型

　　標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液1瓶(5ml)1瓶(2.5ml)即用型

　　標(biāo)記的抗IL-9抗體1瓶(6ml)1瓶(3.0ml)即用型

　　親和鏈酶素-HRP1瓶(10ml)1瓶(5.0ml)即用型

　　洗滌緩沖液1瓶(20ml)1瓶(10ml)按說明書進(jìn)行稀釋

　　底物A1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型

　　底物B1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型

　　終止液1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型

　　標(biāo)本稀釋液1瓶(12ml)1瓶(6.0ml)即用型

　　自備材料

　　1. 蒸餾水。

　　2. 加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。

　　3. 振蕩器及磁力攪拌器等。

　　安全性

　　1. 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請(qǐng)盡快用水沖洗。

　　2. 實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。

　　3. 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

　　操作注意事項(xiàng)

　　1. 試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。

　　2. 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。

　　3. 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

　　4. 使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器。

　　5. 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

　　6. 洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。

　　7. 底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長(zhǎng)時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。

　　8. 加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。

　　9. 按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。

　　樣品收集、處理及保存方法

　　1、 血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

　　2、 血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測(cè)。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

　　3、 細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

　　4、 組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液

　　5、 保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測(cè)前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

　　局限

　　6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無法得到精確的結(jié)果。

　　白介素9(IL-9)ELISA試劑盒性能

　　1. 靈敏度：最小的檢測(cè)濃度小于1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。

　　2. 特異性：不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。

　　3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。

　　結(jié)果判斷與分析

　　1、儀器值：于波長(zhǎng)450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值

　　2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)(Y)，相應(yīng)的IL-9標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)(X)，做得相應(yīng)的曲線，樣品的IL-9含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。

　　3、檢測(cè)值范圍：0-80ng/ml

　　4、敏感度： 0.1 ng/ml

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