實驗原理：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方實驗

　　方法原理

　　牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是一種應(yīng)用zui廣泛和zui普通的細菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基，有時又稱為普通培養(yǎng)基。由于這種培養(yǎng)基中含有一般細菌生長繁殖所需要的zui基本的營養(yǎng)物質(zhì)，所以可供作微生物生長繁殖之用。基礎(chǔ)培養(yǎng)基含有牛肉膏、蛋白胨和NaCI。其中牛肉膏為微生物提供碳源、能源、 磷酸鹽和維生素，蛋白胨主要提供氮源和維生素，而NaCI提供無機鹽。在配制固體培養(yǎng)基時還要加人一定量瓊脂作凝固劑，瓊脂在常用濃度下96℃時溶化，實際應(yīng)用時，一般在沸水浴中或下面墊以石棉網(wǎng)煮沸溶化，以免瓊脂燒焦。瓊脂在40℃時凝固，通常不被微生物分解利用。固體培養(yǎng)基中瓊脂的含量根據(jù)瓊脂的質(zhì)量和氣溫的不同而有所不同。

　　由于這種培養(yǎng)基多用于培養(yǎng)細菌，因此要用稀酸或稀堿將其pH調(diào)至中性或微堿性，以利于細菌的生長繁殖。

　　牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是我司常見代理產(chǎn)品，我司代理BD品牌培養(yǎng)基多年，一直以的質(zhì)量贏得客戶的信賴與支持。本章上海恒遠將為您具體解析牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方：

　　牛肉膏：3.0 g

　　蛋白胨：10.0 g

　　NaCI：5.0 g

　　水：1 000 ml

　　pH：7.4-7.6

　　試劑、試劑盒

　　牛肉膏蛋白胨NaCI水瓊脂氫氧化鈉鹽酸

　　儀器、耗材

　　試管三角瓶燒杯量筒玻璃棒培養(yǎng)基分裝器天平牛角匙高壓蒸氣滅菌鍋pH試紙棉花牛皮紙記號筆麻繩紗布?

　　牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基實驗步驟：

　　一、稱量

　　按培養(yǎng)基配方比例依次準(zhǔn)確地稱取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放人燒杯中，牛肉膏常用玻璃棒挑取，放在小燒杯或表面皿中稱量，用熱水溶化后倒人燒杯。也可放在稱量紙上，稱量后直接放人水中，這時如稍微加熱，牛肉膏便會與稱量紙分離，然后立即取出紙片。

　　蛋白胨很易吸濕，在稱取時動作要迅速。另外，稱藥品時嚴(yán)防藥品混雜，一把牛角匙用于一種藥品，或稱取一種藥品后，洗凈，擦干，再稱取另一藥品。瓶蓋也不要蓋錯。

　　二、溶化

　　在上述燒杯中先加人少于所需要的水量，用玻棒攪勻，然后，在石棉網(wǎng)上加熱使其溶解，或在磁力攪拌器上加熱溶解(圖1)將藥品*溶解后，補充水到所需的總體積，如果配制固體培養(yǎng)基時，將稱好的瓊脂放人已溶的藥品中，再加熱溶化，zui后補足所損失的水分，在制備用三角瓶盛固體培養(yǎng)基時，一般也可先將一定量的液體培養(yǎng)基分裝于三角瓶中，然后按1.5%-2.0%的量將瓊脂直接分別加人各三角瓶中，不必加熱溶化，而是滅菌和加熱溶化同步進行，節(jié)省時間。

　　在瓊脂溶化過程中，應(yīng)控制火力，以免培養(yǎng)基因沸騰而溢出容器。同時，需不斷攪拌，以防瓊脂糊底燒焦。配制培養(yǎng)基時，不可用銅或鐵鍋加熱溶化，以免離子進入培養(yǎng)基中，影響細菌生長。

　　三、調(diào)pH

　　在未調(diào)pH前，先用楂密pH試紙測量培養(yǎng)基的原始pH，如果偏酸，用滴管向培養(yǎng)基中逐滴加 人1 mol/L NaOH邊加邊攪拌，并隨時用pH試紙測其pH，直至pH達7.6。反之，用lmol/L HCl進行調(diào)節(jié)。

　　對于有些要求pH較的微生物，其pH的調(diào)節(jié)可用酸度計進行(使用方法可參考有關(guān)說明書)。

　　pH不要調(diào)過頭，以避免回調(diào)而影響培養(yǎng)基內(nèi)各離子的濃度。配制pH低的瓊脂培養(yǎng)基時，若預(yù)先調(diào)好pH并在高壓蒸氣下滅菌，則瓊脂因水解不能凝固。因此，應(yīng)將培養(yǎng)基的成分和瓊脂分來滅菌后再混合，或在中性pH條件下滅菌，再調(diào)整pH。

　　四、過濾

　　趁熱用濾紙或多層紗布過濾，以利某些實驗結(jié)果的觀察，一般無特殊要求的情況下，這一步可以省去(本實驗勿需過濾)。

　　五、分裝

　　1. 按實驗要求，可將配制的培養(yǎng)基分裝人試管內(nèi)或三角燒瓶內(nèi)。分裝裝置見圖2。

　　培養(yǎng)基分裝裝置

　　A. 漏斗分裝裝置;B. 自動分裝器

　　1. 鐵架;2. 漏斗;3. 乳膠管;4. 彈簧夾;5. 玻管;6. 流速調(diào)節(jié);7. 裝量調(diào)節(jié);8. 開關(guān)

　　2. 液體分裝

　　分裝高度以試管髙度的1/4左右為宜。分裝三角瓶的量則根據(jù)需要而定，一般以不超過三角瓶容積的一半為宜，如果是用于振蕩培養(yǎng)用，則根據(jù)通氣量的要求酌情減少;有的液體培養(yǎng)基在滅菌后，要補加一定量的其他無菌成分，如抗生素等，則裝量一定要準(zhǔn)確。

　　3. 固體分裝

　　分裝試管，其裝量不超過管高的1/5，滅菌后制成斜面。分裝三角燒瓶的量不超過三角燒瓶容積的一半為宜。

　　4. 半固體分裝

　　試管一般以試管髙度的1/3為宜，滅菌后垂直待凝。

　　分裝過程中，注意不要使培養(yǎng)甚沾在管(瓶)上，以免沾污棉塞而引起污染。

　　六、加塞

　　培養(yǎng)基分裝完畢后，在試管口或三角燒瓶口上塞上棉塞(或泡沫塑料塞及試管帽等)，以阻止外界微生物進人培養(yǎng)基內(nèi)而造成污染，并保證有良好的通氣性能。

　　七、包扎

　　加塞后，將全部試管用麻繩捆好，再在棉塞外包一層牛皮紙，以防止滅菌時冷凝水潤濕棉塞， 其外再用一道麻繩扎好，用記號筆注明培養(yǎng)基名稱、組別、配制日期。三角燒瓶加塞后，外包牛皮紙，用麻繩以活結(jié)形式扎好，使用時容易解開，同樣用記號筆注明培養(yǎng)基名稱、組別、配制曰期(有條件的實驗室，可用市售的鋁箔代替牛皮紙，省去用繩扎，而且效果好。)

　　八、滅菌

　　將上述培養(yǎng)基以0.103 MPa，121℃，20 min高壓蒸氣滅菌。

　　九、擱置斜面

　　將滅菌的試管培養(yǎng)基冷至50℃左右(以防斜面上冷凝水太多)，將試管口端擱在玻棒或其他合適高度的器具上，擱置的斜面長度以不超過試管總長的一半為宜(圖3)。

　　十、無菌檢查

　　將滅菌培養(yǎng)基放人37 ℃的溫室中培養(yǎng)24-48 h，以檢査滅菌是否*。

　　牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品，勵志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠銷多個國家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經(jīng)營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準(zhǔn)則、以市場需求為導(dǎo)向，不斷開發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務(wù)質(zhì)量"的方針。