古朵課堂——Elisa試劑盒雙位點(diǎn)一步法原理、應(yīng)用及注意事項(xiàng)

　　雙位點(diǎn)一步法的原理

　　Elisa試劑盒雙位點(diǎn)一步法應(yīng)用識別抗原不同位點(diǎn)2個單克隆抗體(McAb)作雙抗體夾心法測定。包被一個McAb后，同時加入待檢抗原和另一個McAb酶標(biāo)物，待檢抗原上的2個抗原決定簇同時與固相McAb和酶標(biāo)McAb結(jié)合，形成固相McAb-待檢抗原-酶標(biāo)McAb復(fù)合物，加底物通過顯色反應(yīng)進(jìn)行測定。

　　雙位點(diǎn)一步法的操作步驟

　　1、將1個McAb與固相載體連接，形成固相McAb。洗滌除去未結(jié)合物。

　　2、同時加入待檢標(biāo)本和酶標(biāo)McAb，溫育，是待檢抗原和固相McAb及酶標(biāo)McAb反應(yīng)形成雙抗體夾心復(fù)合物。洗滌除去未結(jié)合物。

　　3、加底物顯色。

　　雙位點(diǎn)一步法的應(yīng)用

　　適用于雙抗體夾心法的Elisa試劑盒，有些也可用雙位點(diǎn)一步法檢測。如HBsAg同樣可用此法進(jìn)行檢測，其原理為：將純化的抗HBs吸附于固相載體表面，加入待檢血清(或血漿)，同時加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的另一個抗HBs(酶結(jié)合物)，如血清或血漿中含有HBsAg，則通過溫育形成固相McAb-HBsAg-酶標(biāo)McAb復(fù)合物，加入底物，通過顯色反應(yīng)進(jìn)行測定。若血清或血漿中不含HBsAg，通過洗滌除去未結(jié)合物，加底物后就不顯色。

　　雙位點(diǎn)一步法的評價

　　由于應(yīng)用McAb，雙位點(diǎn)一步法具有很高特異性，一步法省時、簡便。

　　當(dāng)待檢抗原濃度過高時，大量過?？乖謩e飽和固相McAb和酶標(biāo)McAb而抑制夾心復(fù)合物的形成，這種現(xiàn)象稱為鉤狀效應(yīng)(hook effect)，可出現(xiàn)假陰性結(jié)果?？蓪⒋龣z標(biāo)本稀釋后再做或提高抗體試劑的親和力、濃度、純度定以消除鉤狀效應(yīng)。

　　ELISA試劑盒上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品，勵志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠(yuǎn)銷多個國家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經(jīng)營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準(zhǔn)則、以市場需求為導(dǎo)向，不斷開發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務(wù)質(zhì)量"的方針。