古朵來解決您 ELISA 實驗顯性淡、靈敏度低的問題

　　ELISA 實驗結(jié)果常見問題及解決方案——顯色淡靈敏度偏低

　　當(dāng)完成所有實驗步驟進(jìn)行底物 TMB 溶液顯色，發(fā)現(xiàn)酶標(biāo)板中孔的顯色比較淺，只有微弱的信號呈現(xiàn)，可能的原因及解決方法：

　　可能原因解決方法

　　1 試劑盒未充分平衡 試劑盒從 2～8℃冰箱取出后打開盒蓋，于室溫平衡至少 20 分鐘，

　　確保所有試劑已平衡至室溫(約 25℃)。

　　2 樣品不適合做 ELISA 檢測 樣品一般選擇培養(yǎng)上清、血清、血漿。其他樣品形式可能不適

　　合做 ELISA 檢測或者需要優(yōu)化檢測的條件(例如稀釋液的成分)。

　　3 酶標(biāo)板在貯存或洗后拍干時過分干燥 防止板過于干燥。

　　4 包被抗體遭到破壞 操作溫和，移液槍不能碰到孔底。

　　5 樣本和抗體孵育條件不合適 按照說明書條件，建議孵育過程中全程振蕩孵育。

　　6 洗滌浸泡時間過長 按照說明書操作，勿人為增加浸泡時間。

　　7 偶聯(lián) HRP 試劑污染 棄去試劑，重新配置。

　　8 錯誤的稀釋偶聯(lián)HRP試劑 棄去試劑，重新配置。

　　9 TMB 底物孵育時間過短，因非人為因素影響，需要優(yōu)化孵育時間 確定合適的孵育時間：人為判定-最高濃度 S1 出現(xiàn)深藍(lán)色，S4-5

　　有淡藍(lán)色?；驒C(jī)器判定 620nm 波長下測定 OD 值達(dá)到 0.6-0.65。

　　10 樣本濃度過高或存在基質(zhì)效應(yīng) 建議做不同稀釋倍數(shù)，確認(rèn)樣本最佳稀釋倍數(shù)。

　　11 酶標(biāo)儀濾光片設(shè)置有問題或者波長選

　　擇不對 確認(rèn)儀器設(shè)置及選擇正確的波長檢測。

　　12 酶標(biāo)板不適合做 ELISA 不能使用細(xì)胞培養(yǎng)板，建議使用 ELISA 專用高吸附力板子。

　　總結(jié)為避免顯色淡靈敏度低，需注意以下幾點：

　　1、 常規(guī) ELISA 試劑盒平衡至 30min;

　　2、 檢測抗體、偶聯(lián) HRP 請按說明書稀釋比;

　　3、 樣本、抗體孵育條件(溫度、轉(zhuǎn)速)，請根據(jù)說明書;

　　4、 控制 TMB 底物顯色時間。

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