古朵解答：蛋白質(zhì)怎么在制備過程中保持蛋白活性?

　　蛋白質(zhì)的制備是一項十分細致的工作。涉及物理學(xué)、化學(xué)和生物學(xué)的知識很廣。高分子蛋白質(zhì)具有一定的立體構(gòu)象，相當(dāng)不穩(wěn)定，極易變性、變構(gòu)，為得到天然狀態(tài)的蛋白質(zhì)，盡量采用溫和的手段，如中性、低溫、避免起泡等，還要注意防腐。

　　動物材料中的蛋白質(zhì)有些可溶的形式存在于體液(如血漿、消化硫等)中，可以不必經(jīng)過提取直接進行分離。蛋白質(zhì)中的角蛋白、膠原及絲蛋白等不溶性蛋白質(zhì)，只需要適當(dāng)?shù)娜軇┫慈タ扇苄缘陌殡S物，如脂類、糖類以及其他可溶性蛋白質(zhì)，最后剩下的就是不溶性蛋白質(zhì)。這些蛋白質(zhì)經(jīng)細胞破碎后，用水、xi鹽酸及緩沖液等適當(dāng)溶劑，將蛋白質(zhì)溶解出來，再用離心法除去不溶物，即得粗提取液。

　　整個制備過程一般可分為5 個階段：

　?、俨牧系倪x擇和預(yù)處理;

　　②細胞的破碎(有時需進行細胞器的分離);

　?、厶崛?

　　④純化(包括鹽析，有機溶劑沉淀，有機溶劑提取、吸附、層析、超離心及結(jié)晶等);

　?、轁饪s、干燥及保存。以上5 個階段不是要求每個方案都完整地具備，也不是每一階段截然分開;

　　不論是哪一階段使用哪一種方法，均必須在操作中保持生物大分子結(jié)構(gòu)的完整性。保存活性，防止變性及降解現(xiàn)象的發(fā)生。因空間結(jié)構(gòu)主要依靠氫鍵、鹽鍵和范德華力的存在，遇酸、遇堿、高溫、劇烈的機械作用及強烈的輻射等均可導(dǎo)致活性喪失。

　　細胞破碎方法有多種，比如機械法(如組織搗碎勻漿機、玻璃勻漿器)、物理法(反復(fù)凍融法、冷熱交替法、超聲波法、高壓破碎)，化學(xué)及生物化學(xué)法(加入有機溶劑、溶解酶或裂解酶、表面活性劑)等。

　　高壓細胞破碎法是一種物理破碎方法，避免了化學(xué)法和酶法等導(dǎo)致的化學(xué)物殘留和污染等問題。超聲破碎法可能出現(xiàn)的起泡現(xiàn)象在高壓破碎時是不會出現(xiàn)的。

　　樣品經(jīng)適當(dāng)預(yù)處理，再配合使用低溫超高壓連續(xù)流細胞破碎儀，提取到的蛋白質(zhì)活性好。(參考文獻：氯氟氰菊酯對德國小蠊保護酶活性的影響，中國媒介生物學(xué)及控制雜志，2009，20(4)：303-306)。這是因為在細胞破碎過程中，低溫超高壓連續(xù)流細胞破碎儀提供周密的保護，最大限度地保持蛋白質(zhì)活性，具體表現(xiàn)在：

　?、賒u創(chuàng)的沖洗系統(tǒng)及進口鏡面拋光316L不銹鋼管道，防止樣品殘留，保證管道清潔，排除酸堿干擾。 316L不銹鋼拋光管道316L不銹鋼管道

　?、谶M樣、破碎、出樣全過程可在4~6℃低溫循環(huán)水浴中進行，避免高溫導(dǎo)致的蛋白質(zhì)失活。

　　③破碎壓力0~207Mpa連續(xù)可調(diào)，便于摸索最佳破碎條件，保證溫和破碎。

　　蛋白質(zhì)上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品，勵志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠銷多個國家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經(jīng)營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準(zhǔn)則、以市場需求為導(dǎo)向，不斷開發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務(wù)質(zhì)量"的方針。