血液瓊脂培養(yǎng)基的制備實(shí)驗(yàn)方法

　　實(shí)驗(yàn)方法原理 血液培養(yǎng)基是一種含有脫纖維動(dòng)物血(一般用兔血或羊血)的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，因此除培養(yǎng)細(xì)菌所需要的各種營(yíng)養(yǎng)外，還能提供輔酶(如V因子)，血紅素(X因子)等特殊生長(zhǎng)因子。 因此血液培養(yǎng)基常用于培養(yǎng)，分離和保存對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求苛刻的某些病原微生物。此外，這種培養(yǎng)基還可用來(lái)測(cè)定細(xì)菌的溶血作用。

　　實(shí)驗(yàn)材料 兔羊

　　試劑、試劑盒 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基

　　儀器、耗材 三角瓶平皿注射器

　　實(shí)驗(yàn)步驟

　　一、血液培養(yǎng)基配方

　　二、器材

　　1. 培養(yǎng)基

　　牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。

　　2. 儀器或其他用具

　　裝有5~10粒玻璃珠的無(wú)菌三角瓶，無(wú)菌注射器，無(wú)血平皿等。

　　3. 動(dòng)物

　　健康的兔或羊。

　　三、操作步驟

　　牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基的制備(見實(shí)驗(yàn)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基)。

　　2. 無(wú)菌脫纖維兔血(或羊血)的制備

　　用配備18號(hào)針頭的注射器以無(wú)菌操作抽取全血(無(wú)菌采血操作見實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的注射)，并立即注人裝有無(wú)菌玻璃珠(約3 mm)的無(wú)菌三角瓶中，然后搖動(dòng)三角瓶10 min左右，形成的纖維蛋白塊會(huì)沉淀在玻璃珠上，把含血細(xì)胞和血清的上清液傾人無(wú)菌容器即得到脫纖維兔血(或羊血)置冰箱備用。

　　整個(gè)過程必須嚴(yán)格無(wú)菌操作，制備脫纖維血液時(shí)，應(yīng)搖動(dòng)足夠時(shí)間以防凝固。

　　3. 將牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基溶化，待冷至45 ℃時(shí)，以無(wú)菌操作按10%加人無(wú)菌脫纖維兔血(或羊血)于培養(yǎng)基中，立即搖蕩，以便血液和培養(yǎng)基充分混勻。

　　35-45℃時(shí)加入血液是為了保存其中某些不耐熱的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和保存血細(xì)胞的完整，以便于觀察細(xì)菌的溶血作用。同時(shí)，在這種溫度時(shí)瓊脂不會(huì)凝固。

　　4. 迅速以無(wú)菌操作倒入無(wú)菌平皿中，使成血液瓊脂平板。注意不要產(chǎn)生氣泡。

　　5. 置37℃過夜，如無(wú)菌生長(zhǎng)即可使用?！?/p>

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