革蘭陽性菌裂解緩沖液操作步驟及用途說明

　　革蘭陽性菌裂解緩沖液說明：

　　分離純化完整的RNA對于分子生物學的下游實驗極其重要，也是進行基因表達分析的基礎。從革蘭氏陽性和革蘭氏陰性細菌中提取RNA的方法需要蛋白酶消化和有機溶劑抽提去除蛋白質，核酸消化去除DNA。革蘭陽性菌裂解緩沖液主要由Tris-HCl、氯化鈉、SDS等組成，臨用前加入蛋白酶K至終濃度100μg/ml。

　　革蘭陽性菌裂解緩沖液操作步驟：

　　1、 取適量的革蘭陽性菌裂解緩沖液，加入蛋白酶K，待用。

　　2、 取10ml培養(yǎng)物，離心，棄上清。

　　3、 重懸菌體于含有蛋白酶K的革蘭陽性菌裂解緩沖液，在干冰或其他低溫中凍結。

　　4、 解凍并超聲30W 3次，溫育。

　　5、 進行酚氯FANG異戊醇等方法抽提。

　　革蘭陽性菌裂解緩沖液用途：

　　1.裂解都用到緩沖劑,只要在緩沖溶液pH范圍內,BPS、Tris都可以作為緩沖劑,氯化鈉的濃度直接影響到蛋白與蛋白之間的相互作用,一般濃度在0-1M之間。一般而言,氯化鈉濃度越高,越不利于蛋白之間結合。EDTA濃度一般在0-5mM,也是緩沖劑的主要成分,也是酶活性抑止劑,量大可使酶失活保護蛋白。表面活性劑是非常值得關注的,離子性表面活性劑的裂解效果zui強,兩性非離子性表面活性劑裂解效果次之。一般離子性表面活性劑的用量在0.01%-0.05%之間,兩性表面活性劑用量在0-10mM之間,非離子性表面活性劑用量在0.1%-0.2%之間。在裂解液中常用到表面活性劑有Tritonx-100、NP-40、脫氧膽酸鈉、肌氨酸鈉、SDS、CTAB等。

　　2.裂解液中還有一個很重要的成分——蛋白酶抑止劑,其作用是阻止蛋白酶對細胞組織的消化作用,使組織細胞受到*的保護。不同的蛋白酶需要不同的抑止劑,對其選擇相當重要,只有正確選擇,才能有效抑止蛋白的降解,使其維持原有的蛋白相互作用。

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