古朵解析：影響ELISA試劑盒實驗的幾大因素

　　ELISA試劑盒的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性，酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標記的抗原或抗體，也通過反應而結(jié)合在固相載體上 。此時固相上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標本中受檢物 質(zhì)的量直接相關，故可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應的結(jié)果，使測定方法達到很高的敏感度。

　　影響ELISA試劑盒實驗的因素

　　技術人員通過幾年的實驗觀察，認為影響ELISA實驗的因素有如下三方面：

　　一、試劑盒

　　1、抗原、抗體活性對效價的影響：主要是試劑中抗體(或抗原)的效價降低或失活，結(jié)果不易判斷。再有ELISA法靈敏度高，對雜質(zhì)的反應靈敏度也高，實驗中空白對照OD值偏高或假陽性;

　　2、酶結(jié)合物濃度過高，也會導致OD值假性增高。

　　二、試驗儀器

　　1、ELISA試劑盒加樣器是否經(jīng)過校正，酶免測定血清用血量很少，如手工加樣器的性能不好，吸取樣品不，會使結(jié)果忽高忽低;

　　2、每次洗板前，應檢查洗板機針孔有無堵塞。

　　三、操作

　　1、檢測前先將試劑盒從冰箱取出置室溫平衡20min后使用，試劑用完及時放回冰箱冷藏，以免造成試驗結(jié)果假性降低;

　　2、加樣時注意勿觸及包被板底部，以免擦傷包被物使抗體(抗原)脫落而影響實驗結(jié)果的準確性;

　　3、洗滌不充分，會使結(jié)果假性增高，過分洗滌呈假陰性;

　　4、比色時應保持包被孔底部無異物、無水汽，特別是冬季板從37℃水浴箱取出時，底部留有水汽，應將板底擦干后進行比色，水汽或孔內(nèi)氣泡也會使OD值升高;

　　5、抗原與抗體反應達到平衡，依賴于溫度與時間。溫度高于45℃易引起失活及標記物脫落，溫度低于4℃，影響反應速度。

　　總之，由于ELISA試劑盒實驗的影響因素較多，在實際工作中必須操作規(guī)范、仔細，避免和排除各種因素的影響，使之得到準確可靠的檢驗結(jié)果。

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