古朵做elisa實驗時需要注意哪些問題?

　　Elisa實驗中應該注意的問題,包括樣品稀釋、試劑盒平衡、樣品和試劑的混勻、加樣、溫育等問題。

　　1、樣品稀釋 ：

　　一般產(chǎn)品的樣品稀釋倍數(shù)均通過大量試驗確定,以保證試驗的靈敏度和特異性。酶聯(lián)免疫反應是一種敏感性很高的反應,如果血清不稀釋,不可避免會產(chǎn)生很強的非特異性反應,出現(xiàn)假陽性。

　　2、試劑盒平衡：

　　Elisa中所有試劑和板條均應在試驗前平衡至室溫(約25℃),一般需在室溫放置20～30分鐘以上。平衡時間太短會造成試劑混勻不夠,樣品孵育時間相對縮短,ELISA反應不夠充分。冬季室溫低,可將試劑盒置37℃溫箱20分鐘。

　　3、樣品和試劑的混勻：

　　在稀釋前、后的樣品必須充分混勻,所有試劑在加樣前也須搖勻,以保證試驗的均一性。

　　4、加樣：

　　加樣是一項很重要的步驟。加樣不可太快,要避免加在孔壁上部,不可濺出和產(chǎn)生氣泡。加樣太快,無法保證微量加樣的準確性和均一性。加在孔壁上部的非包被區(qū),易導致非特異吸附。

　　5、溫育：

　　溫育是ELISA測定中影響測定成敗最為關鍵的一個因素。ELISA作為一種固相免疫測定,抗原抗體的結合反應在固相上進行,要使液相中的抗原或抗體與固相上的特異抗體或抗原結合,必須在一定的溫度條件下反應一定的時間。

　　6、洗板：

　　固相免疫測定技術是一種非均相免疫測定技術,需以洗滌操作將特異結合于固相的抗原或抗體與反應溫育過程中吸附的非特異成份分離開來,以保證ELISA測定的特異性。洗液盡量不要溢出孔外;加洗液后要靜置1分鐘,甩去板孔中洗液后,一定要大力拍干;及時更換吸水紙,尤其是拍過酶標記物的吸水紙一定要棄去,否則可能影響試驗結果。

　　7、顯色：

　　顯色一定要控制時間,根據(jù)試劑盒說明操作即可。一般來說,顯色時間過短,結果偏低;顯色時間過長,空白增高或者非特異性顯色增加。

　　8、比色：

　　比色要注意波長的選擇。以TMB為底物和以OPD為底物的試劑盒均有使用,而前者比色波長為450nm,后者為492nm,濾光片需根據(jù)要求隨時更換。因此,容易出現(xiàn)濾光片錯用的問題。

　　Elisa實驗 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術相關產(chǎn)品，勵志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠銷多個國家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經(jīng)營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準則、以市場需求為導向，不斷開發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務質(zhì)量"的方針。